CAJ | 학술논문

蛋白磷酸酶4(protein phosphatase 4,PP4)在果蝇、线虫及哺乳动物细胞中都可定位于中心体上,且在果蝇和线虫中参与了中心体成熟.为探讨PP4在哺乳动物细胞中的功能,通过RT-PCR的方法扩增得到PP4基因全长序列,构建pEGFP-C1-PP4融合蛋白表达质粒.将该质粒转染MCF7细胞,用间接免疫荧光技术确认PP4在MCF7细胞中的中心体定位.将PP4蛋白中非磷酸酶保守区序列作为反义抑制作用的靶序列,构建真核表达重组质粒pXJ41-as-PP4并转染MCF7细胞,G418筛选获得稳定的PP4表达受抑制的细胞株MCF7pXJ41-as-PP4对此细胞株进行细胞形态、骨架结构、生长特性及有丝分裂过程观察分析,发现其生长速率明显减慢,血清依赖性增强,TdR双阻断进行周期同步化结合流式细胞术以及有丝分裂指数分析发现细胞进入M期受阻.间接免疫荧光检测发现,细胞中微管组织紊乱,细胞核物质增加,细胞群体中多核细胞比例增加,有丝分裂过程发生异常,出现较多多极分裂现象.这些结果表明,在哺乳动物细胞中,PP4的正常表达对中心体正常行使微管组织功能是必要的,抑制PP4表达将导致细胞增殖及周期进程发生异常.
단백린산매4(protein phosphatase 4,PP4)재과승、선충급포유동물세포중도가정위우중심체상,차재과승화선충중삼여료중심체성숙.위탐토PP4재포유동물세포중적공능,통과RT-PCR적방법확증득도PP4기인전장서렬,구건pEGFP-C1-PP4융합단백표체질립.장해질립전염MCF7세포,용간접면역형광기술학인PP4재MCF7세포중적중심체정위.장PP4단백중비린산매보수구서렬작위반의억제작용적파서렬,구건진핵표체중조질립pXJ41-as-PP4병전염MCF7세포,G418사선획득은정적PP4표체수억제적세포주MCF7pXJ41-as-PP4대차세포주진행세포형태、골가결구、생장특성급유사분렬과정관찰분석,발현기생장속솔명현감만,혈청의뢰성증강,TdR쌍조단진행주기동보화결합류식세포술이급유사분렬지수분석발현세포진입M기수조.간접면역형광검측발현,세포중미관조직문란,세포핵물질증가,세포군체중다핵세포비례증가,유사분렬과정발생이상,출현교다다겁분렬현상.저사결과표명,재포유동물세포중,PP4적정상표체대중심체정상행사미관조직공능시필요적,억제PP4표체장도치세포증식급주기진정발생이상.