癌变·畸变·突变
癌變·畸變·突變
암변·기변·돌변
CARCINOGENSES,TERATOGENSIS AND MUTAGENESIS
2008年
4期
262-266
,共5页
宋旭红%刘戈飞%梁斌%李蕊%谢建平%黄东阳
宋旭紅%劉戈飛%樑斌%李蕊%謝建平%黃東暘
송욱홍%류과비%량빈%리예%사건평%황동양
NADP依赖性视黄醇脱氢/还原酶%选择性剪接%宫颈癌%重组表达
NADP依賴性視黃醇脫氫/還原酶%選擇性剪接%宮頸癌%重組錶達
NADP의뢰성시황순탈경/환원매%선택성전접%궁경암%중조표체
背景与目的:构建宫颈癌细胞中视黄醇脱氢/还原酶-辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)及其选择性剪接亚型NRDRB1原核表达载体,并在BL21-AI大肠杆菌中表达融合蛋白. 材料与方法:用RT-PCR检测宫颈癌组织中NRDR、NRDRB1表达,RACE方法克隆NRDRB1全长cDNA,运用Gateway表达系统将NRDR、NRDRB1编码区序列构建到表达载体,转化到大肠杆菌中表达,表达的融合蛋白通过金属离子亲和层析纯化. 结果:在宫颈鳞癌组织中发现NRDR新的选择性剪接亚型NRDRB1,构建了NRDR、NRDRB1原核表达载体,在BL21-AI中表达出氨基端含6×His标签的重组蛋白,诱导表达4 h后目的蛋白可占总蛋白量的30%～50%,经一步亲和层析得到了高纯度的NRDR及NRDRB1重组蛋白. 结论:在大肠杆菌中获得高效表达的NRDR、NRDRB1蛋白,为进一步研究其功能提供了实验材料.
揹景與目的:構建宮頸癌細胞中視黃醇脫氫/還原酶-輔酶Ⅱ依賴性視黃醇脫氫/還原酶(NRDR)及其選擇性剪接亞型NRDRB1原覈錶達載體,併在BL21-AI大腸桿菌中錶達融閤蛋白. 材料與方法:用RT-PCR檢測宮頸癌組織中NRDR、NRDRB1錶達,RACE方法剋隆NRDRB1全長cDNA,運用Gateway錶達繫統將NRDR、NRDRB1編碼區序列構建到錶達載體,轉化到大腸桿菌中錶達,錶達的融閤蛋白通過金屬離子親和層析純化. 結果:在宮頸鱗癌組織中髮現NRDR新的選擇性剪接亞型NRDRB1,構建瞭NRDR、NRDRB1原覈錶達載體,在BL21-AI中錶達齣氨基耑含6×His標籤的重組蛋白,誘導錶達4 h後目的蛋白可佔總蛋白量的30%～50%,經一步親和層析得到瞭高純度的NRDR及NRDRB1重組蛋白. 結論:在大腸桿菌中穫得高效錶達的NRDR、NRDRB1蛋白,為進一步研究其功能提供瞭實驗材料.
배경여목적:구건궁경암세포중시황순탈경/환원매-보매Ⅱ의뢰성시황순탈경/환원매(NRDR)급기선택성전접아형NRDRB1원핵표체재체,병재BL21-AI대장간균중표체융합단백. 재료여방법:용RT-PCR검측궁경암조직중NRDR、NRDRB1표체,RACE방법극륭NRDRB1전장cDNA,운용Gateway표체계통장NRDR、NRDRB1편마구서렬구건도표체재체,전화도대장간균중표체,표체적융합단백통과금속리자친화층석순화. 결과:재궁경린암조직중발현NRDR신적선택성전접아형NRDRB1,구건료NRDR、NRDRB1원핵표체재체,재BL21-AI중표체출안기단함6×His표첨적중조단백,유도표체4 h후목적단백가점총단백량적30%～50%,경일보친화층석득도료고순도적NRDR급NRDRB1중조단백. 결론:재대장간균중획득고효표체적NRDR、NRDRB1단백,위진일보연구기공능제공료실험재료.
