中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2010年
5期
467-470,474
,共5页
葛阳春%王远志%陈创夫%杜军伟%胡圣伟
葛暘春%王遠誌%陳創伕%杜軍偉%鬍聖偉
갈양춘%왕원지%진창부%두군위%호골위
RNAi%半乳糖特异性凝集素%巨噬细胞RAW264.7%小鼠
RNAi%半乳糖特異性凝集素%巨噬細胞RAW264.7%小鼠
RNAi%반유당특이성응집소%거서세포RAW264.7%소서
目的 构建小鼠巨噬细胞半乳糖特异性凝集素(GSL)靶向的RNAi质粒载体,研究其对小鼠和巨噬细胞GSL基因表达的沉默作用.方法 根据GSL核苷酸序列,合成3条特异性双链小干扰RNA(siRNA)分子,退火形成双链,分别连接到RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen Vector,转化大肠杆菌得到阳性克隆,经测序鉴定确认siRNA载体构建成功后,转染小鼠巨噬细胞RAW264.7及尾静脉注射BALB/c小鼠,应用实时定量PCR和免疫组化法评价siRNA载体对小鼠和巨噬细胞GSL基因表达的抑制作用.结果 siRNA载体对小鼠体内GSL基因的抑制率为84-96%,对巨噬细胞GSL基因的抑制率可达61.98%～83.02%. 结论构建的siRNA载体能有效抑制目的 基因在体内外的表达, 该结果为分析半乳糖特异性凝集素在布鲁氏菌侵染过程中的功能奠定了基础.
目的 構建小鼠巨噬細胞半乳糖特異性凝集素(GSL)靶嚮的RNAi質粒載體,研究其對小鼠和巨噬細胞GSL基因錶達的沉默作用.方法 根據GSL覈苷痠序列,閤成3條特異性雙鏈小榦擾RNA(siRNA)分子,退火形成雙鏈,分彆連接到RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen Vector,轉化大腸桿菌得到暘性剋隆,經測序鑒定確認siRNA載體構建成功後,轉染小鼠巨噬細胞RAW264.7及尾靜脈註射BALB/c小鼠,應用實時定量PCR和免疫組化法評價siRNA載體對小鼠和巨噬細胞GSL基因錶達的抑製作用.結果 siRNA載體對小鼠體內GSL基因的抑製率為84-96%,對巨噬細胞GSL基因的抑製率可達61.98%～83.02%. 結論構建的siRNA載體能有效抑製目的 基因在體內外的錶達, 該結果為分析半乳糖特異性凝集素在佈魯氏菌侵染過程中的功能奠定瞭基礎.
목적 구건소서거서세포반유당특이성응집소(GSL)파향적RNAi질립재체,연구기대소서화거서세포GSL기인표체적침묵작용.방법 근거GSL핵감산서렬,합성3조특이성쌍련소간우RNA(siRNA)분자,퇴화형성쌍련,분별련접도RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen Vector,전화대장간균득도양성극륭,경측서감정학인siRNA재체구건성공후,전염소서거서세포RAW264.7급미정맥주사BALB/c소서,응용실시정량PCR화면역조화법평개siRNA재체대소서화거서세포GSL기인표체적억제작용.결과 siRNA재체대소서체내GSL기인적억제솔위84-96%,대거서세포GSL기인적억제솔가체61.98%～83.02%. 결론구건적siRNA재체능유효억제목적 기인재체내외적표체, 해결과위분석반유당특이성응집소재포로씨균침염과정중적공능전정료기출.
