中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2010年
3期
606-611
,共6页
王玮%杜艳%林国强%李楠楠%孙秉中
王瑋%杜豔%林國彊%李楠楠%孫秉中
왕위%두염%림국강%리남남%손병중
RNA干扰%bcr-abl融合基因%p27基因克隆%K562细胞
RNA榦擾%bcr-abl融閤基因%p27基因剋隆%K562細胞
RNA간우%bcr-abl융합기인%p27기인극륭%K562세포
本研究旨在探讨RNA干扰抑制慢性髓系白血病bcr-abl融合基因表达,以及RNAi和p27基因克隆联合作用对K562细胞的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的调控作用.以细胞系K562为研究对象,合成并转染针对K562细胞bcr-abl融合基因融合位点的21nt siRNA,应用Northern b1ot法检测bcr-abl融合基因的表达,Western blot法检测BCR-ABL蛋白及凋亡相关蛋白BCL-xL的表达;同时应用RT-PCR扩增p27基因,构建P27-pcDNA3.1载体,转染p27基因入缺失p27基因的K562细胞,经筛选得到G418抗性的K562细胞株;经Western blot证实有P27蛋白表达后,联合应用RNA干扰及p27基因克隆,通过MTT法及流式细胞仪等检测联合作用后对K562细胞的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的调控作用.结果表明,RNA干扰组K562细胞bcr-abl融合基因的表达水平明显下降,转染24小时时有18.4%的K562细胞发生凋亡,细胞凋亡相关蛋白BCL-xL的表达水平下调,出现明显的G1期阻滞;表达外源性P27蛋白的P27-pcDNA3.1-K562细胞株生长速度明显慢于对照K562细胞株.流式细胞仪检测显示,G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少;RNA干扰与p27基因克隆联合作用于K562细胞后,凋亡细胞比例明显上升(33.4%).MTT法显示,细胞存活率较单纯p27-K562细胞组及RNA干扰-K562细胞组均明显下降(p＜0.01和p＜0.05).结论:特异性siRNA分子可以抑制bcr-abl融合基因的表达,诱导K562细胞分化或凋亡.RNA干扰联合p27基因克隆对抑制K562细胞增殖及促凋亡方面具有协同作用.
本研究旨在探討RNA榦擾抑製慢性髓繫白血病bcr-abl融閤基因錶達,以及RNAi和p27基因剋隆聯閤作用對K562細胞的細胞增殖、細胞週期及凋亡等的調控作用.以細胞繫K562為研究對象,閤成併轉染針對K562細胞bcr-abl融閤基因融閤位點的21nt siRNA,應用Northern b1ot法檢測bcr-abl融閤基因的錶達,Western blot法檢測BCR-ABL蛋白及凋亡相關蛋白BCL-xL的錶達;同時應用RT-PCR擴增p27基因,構建P27-pcDNA3.1載體,轉染p27基因入缺失p27基因的K562細胞,經篩選得到G418抗性的K562細胞株;經Western blot證實有P27蛋白錶達後,聯閤應用RNA榦擾及p27基因剋隆,通過MTT法及流式細胞儀等檢測聯閤作用後對K562細胞的細胞增殖、細胞週期及凋亡等的調控作用.結果錶明,RNA榦擾組K562細胞bcr-abl融閤基因的錶達水平明顯下降,轉染24小時時有18.4%的K562細胞髮生凋亡,細胞凋亡相關蛋白BCL-xL的錶達水平下調,齣現明顯的G1期阻滯;錶達外源性P27蛋白的P27-pcDNA3.1-K562細胞株生長速度明顯慢于對照K562細胞株.流式細胞儀檢測顯示,G0/G1期細胞增多,S期細胞明顯減少;RNA榦擾與p27基因剋隆聯閤作用于K562細胞後,凋亡細胞比例明顯上升(33.4%).MTT法顯示,細胞存活率較單純p27-K562細胞組及RNA榦擾-K562細胞組均明顯下降(p＜0.01和p＜0.05).結論:特異性siRNA分子可以抑製bcr-abl融閤基因的錶達,誘導K562細胞分化或凋亡.RNA榦擾聯閤p27基因剋隆對抑製K562細胞增殖及促凋亡方麵具有協同作用.
본연구지재탐토RNA간우억제만성수계백혈병bcr-abl융합기인표체,이급RNAi화p27기인극륭연합작용대K562세포적세포증식、세포주기급조망등적조공작용.이세포계K562위연구대상,합성병전염침대K562세포bcr-abl융합기인융합위점적21nt siRNA,응용Northern b1ot법검측bcr-abl융합기인적표체,Western blot법검측BCR-ABL단백급조망상관단백BCL-xL적표체;동시응용RT-PCR확증p27기인,구건P27-pcDNA3.1재체,전염p27기인입결실p27기인적K562세포,경사선득도G418항성적K562세포주;경Western blot증실유P27단백표체후,연합응용RNA간우급p27기인극륭,통과MTT법급류식세포의등검측연합작용후대K562세포적세포증식、세포주기급조망등적조공작용.결과표명,RNA간우조K562세포bcr-abl융합기인적표체수평명현하강,전염24소시시유18.4%적K562세포발생조망,세포조망상관단백BCL-xL적표체수평하조,출현명현적G1기조체;표체외원성P27단백적P27-pcDNA3.1-K562세포주생장속도명현만우대조K562세포주.류식세포의검측현시,G0/G1기세포증다,S기세포명현감소;RNA간우여p27기인극륭연합작용우K562세포후,조망세포비례명현상승(33.4%).MTT법현시,세포존활솔교단순p27-K562세포조급RNA간우-K562세포조균명현하강(p＜0.01화p＜0.05).결론:특이성siRNA분자가이억제bcr-abl융합기인적표체,유도K562세포분화혹조망.RNA간우연합p27기인극륭대억제K562세포증식급촉조망방면구유협동작용.
