生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2011年
1期
17-19
,共3页
木糖异构酶%P.pastoris%pAOX1
木糖異構酶%P.pastoris%pAOX1
목당이구매%P.pastoris%pAOX1
目的:应用P. pastoris的pAOX1表达系统分泌表达重组木糖异构酶.方法:用PCR法从大肠杆菌基因组中扩增木糖异构酶基因(xi).用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切将其基因克隆进P. pastoris表达载体.通过电转法将其木糖异构酶基因重组于P. pastoris基因组,筛选G418抗性700μg/ml的重组子作为工程菌GS115(pPIC9K-xi).在摇瓶中发酵用甲醇诱导表达重组木糖异构酶.用SDS-PAGE分析重组蛋白的表达情况,用糖酵解法对表达产物进行活性分析.结果:木糖异构酶基因在pAOX1的调控下,在P. pastoris中经甲醇诱导能分泌表达,摇瓶发酵2d表达量为35mg/L,表达产物具有代谢木糖的作用.结论:成功地克隆了大肠杆菌的木糖异构酶基因,并实现用pAOX1系统在P. pastoris中表达中木糖异构酶,为用P. pastoris规模化生产重组木糖异构酶奠定了基础.
目的:應用P. pastoris的pAOX1錶達繫統分泌錶達重組木糖異構酶.方法:用PCR法從大腸桿菌基因組中擴增木糖異構酶基因(xi).用EcoRⅠ和NotⅠ雙酶切將其基因剋隆進P. pastoris錶達載體.通過電轉法將其木糖異構酶基因重組于P. pastoris基因組,篩選G418抗性700μg/ml的重組子作為工程菌GS115(pPIC9K-xi).在搖瓶中髮酵用甲醇誘導錶達重組木糖異構酶.用SDS-PAGE分析重組蛋白的錶達情況,用糖酵解法對錶達產物進行活性分析.結果:木糖異構酶基因在pAOX1的調控下,在P. pastoris中經甲醇誘導能分泌錶達,搖瓶髮酵2d錶達量為35mg/L,錶達產物具有代謝木糖的作用.結論:成功地剋隆瞭大腸桿菌的木糖異構酶基因,併實現用pAOX1繫統在P. pastoris中錶達中木糖異構酶,為用P. pastoris規模化生產重組木糖異構酶奠定瞭基礎.
목적:응용P. pastoris적pAOX1표체계통분비표체중조목당이구매.방법:용PCR법종대장간균기인조중확증목당이구매기인(xi).용EcoRⅠ화NotⅠ쌍매절장기기인극륭진P. pastoris표체재체.통과전전법장기목당이구매기인중조우P. pastoris기인조,사선G418항성700μg/ml적중조자작위공정균GS115(pPIC9K-xi).재요병중발효용갑순유도표체중조목당이구매.용SDS-PAGE분석중조단백적표체정황,용당효해법대표체산물진행활성분석.결과:목당이구매기인재pAOX1적조공하,재P. pastoris중경갑순유도능분비표체,요병발효2d표체량위35mg/L,표체산물구유대사목당적작용.결론:성공지극륭료대장간균적목당이구매기인,병실현용pAOX1계통재P. pastoris중표체중목당이구매,위용P. pastoris규모화생산중조목당이구매전정료기출.
