中华眼底病杂志
中華眼底病雜誌
중화안저병잡지
CHINESE JOURNAL OF OCULAR FUNDUS DISEASES
2011年
1期
42-47
,共6页
秦岭%郑钦象%陈浩%李文生%马奥博%申焕君
秦嶺%鄭欽象%陳浩%李文生%馬奧博%申煥君
진령%정흠상%진호%리문생%마오박%신환군
脉络膜肿瘤%吲哚美辛%吲哚美辛/投药和剂量%细胞增殖/药物作用
脈絡膜腫瘤%吲哚美辛%吲哚美辛/投藥和劑量%細胞增殖/藥物作用
맥락막종류%신타미신%신타미신/투약화제량%세포증식/약물작용
Choroid Neoplasms%Indomethacin%Indomethacin/administration & dosage%Cell proliferation/ drug effects
目的 观察环氧化酶抑制剂吲哚美辛(IN)对脉络膜黑色素瘤细胞OCM-1增生活性的影响并探讨其作用机制.方法 体外培养OCM-1细胞,采用25、50、100、200、400μmol/L IN对OCM-1细胞进行干预,应用四氮唑化合物(MTT)法检测不同浓度IN对OCM-1细胞增生活性的影响;侵袭实验检测IN对OCM-1细胞侵袭力的影响;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IN对OCM-1细胞内血管内皮生长因子(VEGF)及凋亡抑制因子(survivin)mRNA表达的调节作用;免疫荧光化学检测OCM-1细胞内VEGF、survivin蛋白的定位及表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测IN对OCM-1细胞内VEGF、survivin蛋白表达的影响.结果 不同浓度IN对OCM-1细胞的增生及侵袭均有明显的抑制作用,其抑制率呈浓度-时间依赖性(MTT:24 h:F=19.642,P＜0.01;48 h:F=136.597,P＜0.01;72 h:F=582.543,P＜0.01;侵袭实验:F=54.225,P＜0.01).免疫荧光化学检测结果 显示:VEGF、survivin 2种因子在OCM-1细胞内均呈阳性表达且多数表达于细胞胞浆内;RT-PCR检测结果 显示:100、200、400μmol/L IN可抑制OCM-1细胞内survivin mRNA的表达(F=16.679,P＜0.01),但对细胞内VEGF mRNA的表达无抑制作用.ELISA法测出未用药组、100、400 μmol/L IN作用OCM-1细胞24 h后,细胞内survivin的浓度分别为(787.33±47.37)、(257.00±26.21)、(123.33±8.02)pg/ml;Western blot进一步验证了IN可抑制OCM-1细胞内survivin蛋白的表达,但对VEGF的表达无抑制作用.结论 IN能够抑制OCM-1细胞的增生及侵袭,其机制可能与其下调OCM-1细胞内survivin因子的表达有关.
目的 觀察環氧化酶抑製劑吲哚美辛(IN)對脈絡膜黑色素瘤細胞OCM-1增生活性的影響併探討其作用機製.方法 體外培養OCM-1細胞,採用25、50、100、200、400μmol/L IN對OCM-1細胞進行榦預,應用四氮唑化閤物(MTT)法檢測不同濃度IN對OCM-1細胞增生活性的影響;侵襲實驗檢測IN對OCM-1細胞侵襲力的影響;逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)檢測IN對OCM-1細胞內血管內皮生長因子(VEGF)及凋亡抑製因子(survivin)mRNA錶達的調節作用;免疫熒光化學檢測OCM-1細胞內VEGF、survivin蛋白的定位及錶達,酶聯免疫吸附測定(ELISA)及蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測IN對OCM-1細胞內VEGF、survivin蛋白錶達的影響.結果 不同濃度IN對OCM-1細胞的增生及侵襲均有明顯的抑製作用,其抑製率呈濃度-時間依賴性(MTT:24 h:F=19.642,P＜0.01;48 h:F=136.597,P＜0.01;72 h:F=582.543,P＜0.01;侵襲實驗:F=54.225,P＜0.01).免疫熒光化學檢測結果 顯示:VEGF、survivin 2種因子在OCM-1細胞內均呈暘性錶達且多數錶達于細胞胞漿內;RT-PCR檢測結果 顯示:100、200、400μmol/L IN可抑製OCM-1細胞內survivin mRNA的錶達(F=16.679,P＜0.01),但對細胞內VEGF mRNA的錶達無抑製作用.ELISA法測齣未用藥組、100、400 μmol/L IN作用OCM-1細胞24 h後,細胞內survivin的濃度分彆為(787.33±47.37)、(257.00±26.21)、(123.33±8.02)pg/ml;Western blot進一步驗證瞭IN可抑製OCM-1細胞內survivin蛋白的錶達,但對VEGF的錶達無抑製作用.結論 IN能夠抑製OCM-1細胞的增生及侵襲,其機製可能與其下調OCM-1細胞內survivin因子的錶達有關.
목적 관찰배양화매억제제신타미신(IN)대맥락막흑색소류세포OCM-1증생활성적영향병탐토기작용궤제.방법 체외배양OCM-1세포,채용25、50、100、200、400μmol/L IN대OCM-1세포진행간예,응용사담서화합물(MTT)법검측불동농도IN대OCM-1세포증생활성적영향;침습실험검측IN대OCM-1세포침습력적영향;역전록취합매련반응(RT-PCR)검측IN대OCM-1세포내혈관내피생장인자(VEGF)급조망억제인자(survivin)mRNA표체적조절작용;면역형광화학검측OCM-1세포내VEGF、survivin단백적정위급표체,매련면역흡부측정(ELISA)급단백면역인적법(Western blot)검측IN대OCM-1세포내VEGF、survivin단백표체적영향.결과 불동농도IN대OCM-1세포적증생급침습균유명현적억제작용,기억제솔정농도-시간의뢰성(MTT:24 h:F=19.642,P＜0.01;48 h:F=136.597,P＜0.01;72 h:F=582.543,P＜0.01;침습실험:F=54.225,P＜0.01).면역형광화학검측결과 현시:VEGF、survivin 2충인자재OCM-1세포내균정양성표체차다수표체우세포포장내;RT-PCR검측결과 현시:100、200、400μmol/L IN가억제OCM-1세포내survivin mRNA적표체(F=16.679,P＜0.01),단대세포내VEGF mRNA적표체무억제작용.ELISA법측출미용약조、100、400 μmol/L IN작용OCM-1세포24 h후,세포내survivin적농도분별위(787.33±47.37)、(257.00±26.21)、(123.33±8.02)pg/ml;Western blot진일보험증료IN가억제OCM-1세포내survivin단백적표체,단대VEGF적표체무억제작용.결론 IN능구억제OCM-1세포적증생급침습,기궤제가능여기하조OCM-1세포내survivin인자적표체유관.
Objective To observe the influence of the indomethacin on the proliferative and invasive activity of OCM-1 human choroidal melanoma cells. Methods OCM-1 cells were cultured with different concentrations of indomethacin (25, 50, 100, 200, 400 μmol/L ), and their proliferation were assessed by methyl thiazolyl tetrazolium(MTT), invasive behaviors were examined by cell invasion assays, expression of survivin and VEGF were evaluated by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR),immunofluorescence staining, ELISA and western blot analysis. Result All concentrations of indomethacin in this study can inhibit the proliferation and invasion of OCM-1 cells in a time and dosage-dependant manner (MTT/24 h: F= 19. 642, P＜0.01;MTT/48 h: F= 136. 597, P＜0. 01;MTT/72 h: F= 582. 543, P＜ 0. 01;invasion assays: F= 54. 225, P＜ 0. 01). Immunofluorescence staining indicated that survivin and VEGF mainly expressed in the cytoplasm of OCM-1 cells. Survivin mRNA in OCM-1 cells was inhibited by 100,200, 400 μmol/L indomethacin (F= 16. 679, P＜0.01). The concentrations of survivin were (787.3±47.37), (257.0± 26.21), (123. 3± 8.02) pg/ml in control group and 100, 400 μmol/L indomethacin groups, respectively. Survivin expression was also significantly down-regulated in indomethacin-treated cells by Western blot analysis. Indomethacin had no effects on VEGF expression in OCM-1 cells. Conclusions Indomethacin can inhibit proliferation and invasion of OCM-1 cells in vitro, down-regulated expression of survivin may be the mechanism.
