小干扰RNA抑制HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒复制与表达
소간우RNA억제HepG2.2.15세포중을형간염병독복제여표체
Depressant Effect of siRNA on the Expression and Replication of Hepatitis B Virus in HepG2.2.15 Cell
  • 万方数据
    实用儿科临床杂志 실용인과림상잡지
    Journal of Applied Clinical Pediatrics
    2008年 22期 1750-1753 ,共4页

    任广立%方颖%张卫云%马恒颢%许蔓春%欧巧群%罗爱武%王鲜艳%彭智勇%白雪帆

    임엄립%방영%장위운%마항호%허만춘%구교군%라애무%왕선염%팽지용%백설범

    乙型肝炎病毒%小干扰RNA%基因治疗%HepG2.2.15细胞 乙型肝炎病毒%小榦擾RNA%基因治療%HepG2.2.15細胞
    을형간염병독%소간우RNA%기인치료%HepG2.2.15세포
    目的 了解基于载体的siRNA对HepG2.2.15细胞中HBV的抑制作用,观察特异性siRNA载体对细胞的毒副作用及可能的非靶向效应,探讨新的抗病毒治疗手段.方法 根据GenBank收录HepG2.2.15细胞系中HBV基因全序列,设计构建针对HBV的C基因区的3条siRNA的双链复合体,经退火连接入p-Silencer-Cmv 4.1载体,连接产物转化JM109细胞,载体经聚丙烯酰胺凝胶电泳及测序鉴定后中量超纯提取质粒,定量后与转染试剂siPort XP-1转染HepG2.2.15细胞.免疫荧光及Western blot检测病毒蛋白HBsAg、HBeAg的表达;RT-PCR检测HBV RNA的表达变化;Real-time PCR定量检测HBV DNA拷贝变化.同时采用MTT法检测细胞的生长曲线与生长率.ELISA法检测IFN-α的表达变化.结果 Western Blot结果显示在转染第3大p-C2对HBsAg、HBeAg的抑制率分别为(81.15±0.69)%、(88.12±0.92)%,免疫荧光显示同样结果.RT-PCR检测结果显示C基因特异的表达性siRNA可以显著抑制HBV的mRNA表达,对C区HBV mRNA的抑制达96.9%.定量PCR检测显示特异性siRNA使HBV DNA拷贝数降低102个数量级.而MTT检测表明该特异性siRNA表达载体不影响细胞的生长曲线与生长率,治疗组与对照组比较无差异.ELISA法检测表明特异性siRNA并小影响细胞干扰素的表达,p-C1、p-C2、p-C3组与未转染组、p-NC组比较表达均无差异.结论 基于载体的特异性siRNA在体外可抑制HepG2.2.15细胞中HBV的复制和表达.该抑制作用是特异性的,同时对细胞无明显毒副作用.该作用为基因水平的裂解作用,不会出现耐药现象.
    목적 료해기우재체적siRNA대HepG2.2.15세포중HBV적억제작용,관찰특이성siRNA재체대세포적독부작용급가능적비파향효응,탐토신적항병독치료수단.방법 근거GenBank수록HepG2.2.15세포계중HBV기인전서렬,설계구건침대HBV적C기인구적3조siRNA적쌍련복합체,경퇴화련접입p-Silencer-Cmv 4.1재체,련접산물전화JM109세포,재체경취병희선알응효전영급측서감정후중량초순제취질립,정량후여전염시제siPort XP-1전염HepG2.2.15세포.면역형광급Western blot검측병독단백HBsAg、HBeAg적표체;RT-PCR검측HBV RNA적표체변화;Real-time PCR정량검측HBV DNA고패변화.동시채용MTT법검측세포적생장곡선여생장솔.ELISA법검측IFN-α적표체변화.결과 Western Blot결과현시재전염제3대p-C2대HBsAg、HBeAg적억제솔분별위(81.15±0.69)%、(88.12±0.92)%,면역형광현시동양결과.RT-PCR검측결과현시C기인특이적표체성siRNA가이현저억제HBV적mRNA표체,대C구HBV mRNA적억제체96.9%.정량PCR검측현시특이성siRNA사HBV DNA고패수강저102개수량급.이MTT검측표명해특이성siRNA표체재체불영향세포적생장곡선여생장솔,치료조여대조조비교무차이.ELISA법검측표명특이성siRNA병소영향세포간우소적표체,p-C1、p-C2、p-C3조여미전염조、p-NC조비교표체균무차이.결론 기우재체적특이성siRNA재체외가억제HepG2.2.15세포중HBV적복제화표체.해억제작용시특이성적,동시대세포무명현독부작용.해작용위기인수평적렬해작용,불회출현내약현상.
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