西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2012年
2期
164-168
,共5页
崔美灵%张瑜%刘锦锋%刘红莉%赵英仁
崔美靈%張瑜%劉錦鋒%劉紅莉%趙英仁
최미령%장유%류금봉%류홍리%조영인
乙型肝炎病毒(HBV)%全X基因%X基因%细胞增殖%凋亡%端粒酶活性
乙型肝炎病毒(HBV)%全X基因%X基因%細胞增殖%凋亡%耑粒酶活性
을형간염병독(HBV)%전X기인%X기인%세포증식%조망%단립매활성
目的 克隆并构建乙型肝炎病毒(HBV)全X基因表达载体,探讨HBV全X基因对HEK293细胞功能的影响,并比较HBV全X基因与X基因对细胞影响的差异.方法 应用基因克隆的方法从慢性HBV感染者血清中获得HBV全X及X基因,构建带有HBV全X基因与X基因的真核表达载体以及带有绿色荧光基团GFP的重组质粒;细胞转染技术将其分别转入HEK293细胞,RT-PCR及Western-blot技术验证HBV全X基因及X基因在细胞内的表达;荧光显微镜下观察其在细胞内的定位情况;MTT法检测细胞增殖率的变化;AnnexinV流式细胞分析技术检测其对细胞凋亡率的影响;TRAP实时荧光定量PCR法检测各组细胞端粒酶活性的变化.结果 成功构建带有HBV全X基因的重组质粒且目的基因能在HEK293细胞内高表达;表达的HBV全X蛋白主要分布在胞核,而X蛋白在胞质、胞核均有分布;转染HBV全X和X基因后细胞增殖率分别为(0.826±0.002)％和(0.805±0.013)％,显著高于转染空质粒(0.691±0.035)％和未转染对照组(0.681±0.018)％,差异具有统计学意义(P＜0.05);转染HBV全X和X基因后细胞凋亡率分别为(25.25±3.02)％及(21.34±2.16)％,显著高于转染空质粒(13.49±1.49)％及未转染细胞对照组(11.37±1.58)％,差异具有统计学意义(P＜0.05);转染全X及X基因细胞的端粒酶活性亦显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);全X转染组细胞的增殖率、凋亡率及端粒酶活性均高于X转染组,但差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 HBV全X基因具有促细胞增殖、凋亡以及影响细胞端粒酶活性的作用,其可能通过不同于HBV X基因的细胞内途径影响细胞的生物学功能,从而在HBV相关的原发性肝细胞癌发生发展中起作用.
目的 剋隆併構建乙型肝炎病毒(HBV)全X基因錶達載體,探討HBV全X基因對HEK293細胞功能的影響,併比較HBV全X基因與X基因對細胞影響的差異.方法 應用基因剋隆的方法從慢性HBV感染者血清中穫得HBV全X及X基因,構建帶有HBV全X基因與X基因的真覈錶達載體以及帶有綠色熒光基糰GFP的重組質粒;細胞轉染技術將其分彆轉入HEK293細胞,RT-PCR及Western-blot技術驗證HBV全X基因及X基因在細胞內的錶達;熒光顯微鏡下觀察其在細胞內的定位情況;MTT法檢測細胞增殖率的變化;AnnexinV流式細胞分析技術檢測其對細胞凋亡率的影響;TRAP實時熒光定量PCR法檢測各組細胞耑粒酶活性的變化.結果 成功構建帶有HBV全X基因的重組質粒且目的基因能在HEK293細胞內高錶達;錶達的HBV全X蛋白主要分佈在胞覈,而X蛋白在胞質、胞覈均有分佈;轉染HBV全X和X基因後細胞增殖率分彆為(0.826±0.002)％和(0.805±0.013)％,顯著高于轉染空質粒(0.691±0.035)％和未轉染對照組(0.681±0.018)％,差異具有統計學意義(P＜0.05);轉染HBV全X和X基因後細胞凋亡率分彆為(25.25±3.02)％及(21.34±2.16)％,顯著高于轉染空質粒(13.49±1.49)％及未轉染細胞對照組(11.37±1.58)％,差異具有統計學意義(P＜0.05);轉染全X及X基因細胞的耑粒酶活性亦顯著高于對照組,差異有統計學意義(P＜0.05);全X轉染組細胞的增殖率、凋亡率及耑粒酶活性均高于X轉染組,但差異均無統計學意義(P＞0.05).結論 HBV全X基因具有促細胞增殖、凋亡以及影響細胞耑粒酶活性的作用,其可能通過不同于HBV X基因的細胞內途徑影響細胞的生物學功能,從而在HBV相關的原髮性肝細胞癌髮生髮展中起作用.
목적 극륭병구건을형간염병독(HBV)전X기인표체재체,탐토HBV전X기인대HEK293세포공능적영향,병비교HBV전X기인여X기인대세포영향적차이.방법 응용기인극륭적방법종만성HBV감염자혈청중획득HBV전X급X기인,구건대유HBV전X기인여X기인적진핵표체재체이급대유록색형광기단GFP적중조질립;세포전염기술장기분별전입HEK293세포,RT-PCR급Western-blot기술험증HBV전X기인급X기인재세포내적표체;형광현미경하관찰기재세포내적정위정황;MTT법검측세포증식솔적변화;AnnexinV류식세포분석기술검측기대세포조망솔적영향;TRAP실시형광정량PCR법검측각조세포단립매활성적변화.결과 성공구건대유HBV전X기인적중조질립차목적기인능재HEK293세포내고표체;표체적HBV전X단백주요분포재포핵,이X단백재포질、포핵균유분포;전염HBV전X화X기인후세포증식솔분별위(0.826±0.002)％화(0.805±0.013)％,현저고우전염공질립(0.691±0.035)％화미전염대조조(0.681±0.018)％,차이구유통계학의의(P＜0.05);전염HBV전X화X기인후세포조망솔분별위(25.25±3.02)％급(21.34±2.16)％,현저고우전염공질립(13.49±1.49)％급미전염세포대조조(11.37±1.58)％,차이구유통계학의의(P＜0.05);전염전X급X기인세포적단립매활성역현저고우대조조,차이유통계학의의(P＜0.05);전X전염조세포적증식솔、조망솔급단립매활성균고우X전염조,단차이균무통계학의의(P＞0.05).결론 HBV전X기인구유촉세포증식、조망이급영향세포단립매활성적작용,기가능통과불동우HBV X기인적세포내도경영향세포적생물학공능,종이재HBV상관적원발성간세포암발생발전중기작용.
