畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2011年
7期
955-962
,共8页
减毒鼠伤寒沙门氏菌%PRRSV%GP5蛋白%活载体疫苗
減毒鼠傷寒沙門氏菌%PRRSV%GP5蛋白%活載體疫苗
감독서상한사문씨균%PRRSV%GP5단백%활재체역묘
本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP5蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株.PCR克隆除去信号肽序列的PRRSV ORF5基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-ORF5.将重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(缺失Asd、Cya、Crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-ORF5).鉴定重组菌GP5蛋白的表达；测定重组菌定居特性及安全性；检测免疫小鼠血清抗体；流式细胞仪检测重组菌对小鼠T淋巴细胞CD4+和CD8+亚群的影响；最后进行免疫猪血清抗体检测.结果表明,酶切鉴定证实重组质粒构建成功；Western blot证实重组菌表达的GP5蛋白能与PRRSV阳性血清特异性结合；重组菌在体内可较稳定地定居于小鼠的肠系膜淋巴结和脾脏中,并在其中表达出GP5蛋白；小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用；重组菌口服免疫小鼠可以产生抗GP5蛋白抗体且抗体具有中和活性；重组菌株能不同程度地使CD4+、CD4+/CD8+升高,而使CD8+下降,表明重组菌对细胞免疫功能具有调节作用；淋巴细胞增殖试验表明,重组菌能诱发小鼠产生较强的细胞免疫应答；重组菌口服免疫猪可以产生抗GP5蛋白抗体.本试验成功构建了能稳定表达PRRSV GP5蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,为研究PRRSV口服基因工程疫苗奠定基础.
本試驗旨在構建錶達豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV) GP5蛋白的口服重組減毒鼠傷寒沙門氏菌活載體疫苗株.PCR剋隆除去信號肽序列的PRRSV ORF5基因,將其插入到錶達載體pYA3341中,構建重組質粒pYA3341-ORF5.將重組質粒電轉入鼠傷寒沙門氏菌疫苗株X4550(缺失Asd、Cya、Crp基因),穫得重組疫苗菌株X4550(pYA3341-ORF5).鑒定重組菌GP5蛋白的錶達；測定重組菌定居特性及安全性；檢測免疫小鼠血清抗體；流式細胞儀檢測重組菌對小鼠T淋巴細胞CD4+和CD8+亞群的影響；最後進行免疫豬血清抗體檢測.結果錶明,酶切鑒定證實重組質粒構建成功；Western blot證實重組菌錶達的GP5蛋白能與PRRSV暘性血清特異性結閤；重組菌在體內可較穩定地定居于小鼠的腸繫膜淋巴結和脾髒中,併在其中錶達齣GP5蛋白；小鼠口服試驗證實重組菌無毒性作用；重組菌口服免疫小鼠可以產生抗GP5蛋白抗體且抗體具有中和活性；重組菌株能不同程度地使CD4+、CD4+/CD8+升高,而使CD8+下降,錶明重組菌對細胞免疫功能具有調節作用；淋巴細胞增殖試驗錶明,重組菌能誘髮小鼠產生較彊的細胞免疫應答；重組菌口服免疫豬可以產生抗GP5蛋白抗體.本試驗成功構建瞭能穩定錶達PRRSV GP5蛋白的口服減毒鼠傷寒沙門氏菌疫苗株,為研究PRRSV口服基因工程疫苗奠定基礎.
본시험지재구건표체저번식여호흡종합정병독(PRRSV) GP5단백적구복중조감독서상한사문씨균활재체역묘주.PCR극륭제거신호태서렬적PRRSV ORF5기인,장기삽입도표체재체pYA3341중,구건중조질립pYA3341-ORF5.장중조질립전전입서상한사문씨균역묘주X4550(결실Asd、Cya、Crp기인),획득중조역묘균주X4550(pYA3341-ORF5).감정중조균GP5단백적표체；측정중조균정거특성급안전성；검측면역소서혈청항체；류식세포의검측중조균대소서T림파세포CD4+화CD8+아군적영향；최후진행면역저혈청항체검측.결과표명,매절감정증실중조질립구건성공；Western blot증실중조균표체적GP5단백능여PRRSV양성혈청특이성결합；중조균재체내가교은정지정거우소서적장계막림파결화비장중,병재기중표체출GP5단백；소서구복시험증실중조균무독성작용；중조균구복면역소서가이산생항GP5단백항체차항체구유중화활성；중조균주능불동정도지사CD4+、CD4+/CD8+승고,이사CD8+하강,표명중조균대세포면역공능구유조절작용；림파세포증식시험표명,중조균능유발소서산생교강적세포면역응답；중조균구복면역저가이산생항GP5단백항체.본시험성공구건료능은정표체PRRSV GP5단백적구복감독서상한사문씨균역묘주,위연구PRRSV구복기인공정역묘전정기출.
