生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2011年
3期
379-383
,共5页
张志清%刘晓华%段梦%商艳芬%王立群%冷雪%钱令嘉
張誌清%劉曉華%段夢%商豔芬%王立群%冷雪%錢令嘉
장지청%류효화%단몽%상염분%왕립군%랭설%전령가
热激蛋白70%酵母双杂交系统%自激活活性%相互作用蛋白质
熱激蛋白70%酵母雙雜交繫統%自激活活性%相互作用蛋白質
열격단백70%효모쌍잡교계통%자격활활성%상호작용단백질
目的:利用酵母双杂交系统从人心肌cDNA文库中筛选与热激蛋白70(HSP70)相互作用的蛋白质.方法:从人心脏cDNA文库扩增Hsp70基因,克隆于pGBKT7载体上,酶切鉴定及序列分析,并检测pGBKT7-Hsp70酵母细胞AH109中的自激活活性;将构建的酵母表达诱饵质粒载体pGBKT7-Hsp70转化AH109酵母细胞,与转化有人心脏cDNA文库的酵母Y187进行交配实验,筛选与HSP70相互作用的蛋白质,通过一对一的回复杂交实验排除假阳性,对阳性克隆进行序列测定和生物信息学分析.结果:构建了"诱饵"质粒载体pGBKT7-Hsp70,并证明其在酵母双杂交系统中无自激活活性,筛选得到多个与Hsp70相互作用的阳性转化子,并最终得到HSP70的1个相互作用蛋白质HIP.结论:应用酵母双杂交系统筛选出与HSP70相互作用的1个蛋白质,它们的相互作用可能与HSP70发挥细胞分子伴侣作用有关.
目的:利用酵母雙雜交繫統從人心肌cDNA文庫中篩選與熱激蛋白70(HSP70)相互作用的蛋白質.方法:從人心髒cDNA文庫擴增Hsp70基因,剋隆于pGBKT7載體上,酶切鑒定及序列分析,併檢測pGBKT7-Hsp70酵母細胞AH109中的自激活活性;將構建的酵母錶達誘餌質粒載體pGBKT7-Hsp70轉化AH109酵母細胞,與轉化有人心髒cDNA文庫的酵母Y187進行交配實驗,篩選與HSP70相互作用的蛋白質,通過一對一的迴複雜交實驗排除假暘性,對暘性剋隆進行序列測定和生物信息學分析.結果:構建瞭"誘餌"質粒載體pGBKT7-Hsp70,併證明其在酵母雙雜交繫統中無自激活活性,篩選得到多箇與Hsp70相互作用的暘性轉化子,併最終得到HSP70的1箇相互作用蛋白質HIP.結論:應用酵母雙雜交繫統篩選齣與HSP70相互作用的1箇蛋白質,它們的相互作用可能與HSP70髮揮細胞分子伴侶作用有關.
목적:이용효모쌍잡교계통종인심기cDNA문고중사선여열격단백70(HSP70)상호작용적단백질.방법:종인심장cDNA문고확증Hsp70기인,극륭우pGBKT7재체상,매절감정급서렬분석,병검측pGBKT7-Hsp70효모세포AH109중적자격활활성;장구건적효모표체유이질립재체pGBKT7-Hsp70전화AH109효모세포,여전화유인심장cDNA문고적효모Y187진행교배실험,사선여HSP70상호작용적단백질,통과일대일적회복잡교실험배제가양성,대양성극륭진행서렬측정화생물신식학분석.결과:구건료"유이"질립재체pGBKT7-Hsp70,병증명기재효모쌍잡교계통중무자격활활성,사선득도다개여Hsp70상호작용적양성전화자,병최종득도HSP70적1개상호작용단백질HIP.결론:응용효모쌍잡교계통사선출여HSP70상호작용적1개단백질,타문적상호작용가능여HSP70발휘세포분자반려작용유관.
