基因组学与应用生物学
基因組學與應用生物學
기인조학여응용생물학
GENOMICS AND APPLIED BIOLOGY
2011年
4期
311-315
,共5页
李运娜%黄金贵%李建华%宫鹏涛%杨举%李赫%李淑红%张西臣
李運娜%黃金貴%李建華%宮鵬濤%楊舉%李赫%李淑紅%張西臣
리운나%황금귀%리건화%궁붕도%양거%리혁%리숙홍%장서신
刚地弓形虫%TgCyP%基因克隆%真核表达
剛地弓形蟲%TgCyP%基因剋隆%真覈錶達
강지궁형충%TgCyP%기인극륭%진핵표체
亲环蛋白(cyclophilin,CyP)是一类广泛存在于原核和真核生物体内的胞溶性蛋白,是刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)速殖子的主要成分,能够诱导产生IL-12和IFN-γ,在控制弓形虫急性感染过程中起重要作用.本研究根据GenBank发表的TgCyP基因序列,设计并合成一对包含BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点的引物,以cDNA为模板,应用PCR技术扩增TgCyP基因.PCR产物连接到pMD18-T克隆载体.用限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切克隆载体,将TgCyP目的基因克隆到载体pVAX1,构建真核表达质粒pVAX1-TgCyP.将真核表达质粒转染Hela细胞,利用间接免疫荧光检测其在Hela细胞内的表达情况.结果表明扩增的TgCyP基因与GenBank上相应基因序列(U04633.1)的一致性达100%,构建的真核表达质粒pVAX1-TgCyP能在转染的Hela细胞中表达,其表达产物与刚地弓形虫阳性血清具有免疫反应性.本研究表明TgCyP有望作为弓形虫疫苗的候选抗原,将为进一步研究该质粒的动物免疫试验奠定基础.
親環蛋白(cyclophilin,CyP)是一類廣汎存在于原覈和真覈生物體內的胞溶性蛋白,是剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)速殖子的主要成分,能夠誘導產生IL-12和IFN-γ,在控製弓形蟲急性感染過程中起重要作用.本研究根據GenBank髮錶的TgCyP基因序列,設計併閤成一對包含BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位點的引物,以cDNA為模闆,應用PCR技術擴增TgCyP基因.PCR產物連接到pMD18-T剋隆載體.用限製性內切酶BamHⅠ和EcoRⅠ雙酶切剋隆載體,將TgCyP目的基因剋隆到載體pVAX1,構建真覈錶達質粒pVAX1-TgCyP.將真覈錶達質粒轉染Hela細胞,利用間接免疫熒光檢測其在Hela細胞內的錶達情況.結果錶明擴增的TgCyP基因與GenBank上相應基因序列(U04633.1)的一緻性達100%,構建的真覈錶達質粒pVAX1-TgCyP能在轉染的Hela細胞中錶達,其錶達產物與剛地弓形蟲暘性血清具有免疫反應性.本研究錶明TgCyP有望作為弓形蟲疫苗的候選抗原,將為進一步研究該質粒的動物免疫試驗奠定基礎.
친배단백(cyclophilin,CyP)시일류엄범존재우원핵화진핵생물체내적포용성단백,시강지궁형충(Toxoplasma gondii)속식자적주요성분,능구유도산생IL-12화IFN-γ,재공제궁형충급성감염과정중기중요작용.본연구근거GenBank발표적TgCyP기인서렬,설계병합성일대포함BamHⅠ화EcoRⅠ매절위점적인물,이cDNA위모판,응용PCR기술확증TgCyP기인.PCR산물련접도pMD18-T극륭재체.용한제성내절매BamHⅠ화EcoRⅠ쌍매절극륭재체,장TgCyP목적기인극륭도재체pVAX1,구건진핵표체질립pVAX1-TgCyP.장진핵표체질립전염Hela세포,이용간접면역형광검측기재Hela세포내적표체정황.결과표명확증적TgCyP기인여GenBank상상응기인서렬(U04633.1)적일치성체100%,구건적진핵표체질립pVAX1-TgCyP능재전염적Hela세포중표체,기표체산물여강지궁형충양성혈청구유면역반응성.본연구표명TgCyP유망작위궁형충역묘적후선항원,장위진일보연구해질립적동물면역시험전정기출.
