中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2011年
5期
85-89
,共5页
任春芝%季燚%刘丹丹%李建梅%王尚尚%陶建平%王志强%许金俊
任春芝%季燚%劉丹丹%李建梅%王尚尚%陶建平%王誌彊%許金俊
임춘지%계일%류단단%리건매%왕상상%도건평%왕지강%허금준
日本大耳白兔%干扰素-γ%克隆%序列分析%表达
日本大耳白兔%榦擾素-γ%剋隆%序列分析%錶達
일본대이백토%간우소-γ%극륭%서렬분석%표체
提取经ConA刺激后的日本大耳白兔外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR技术对其JFN-γ基因进行扩增和测序.将去除信号肽的IFN-γ基因片段插入原核表达载体pET-30a并在大肠杆菌中进行表达.结果显示,克隆的JFN-γ基因长为504个核苷酸,具有一个完整的开放阅读框,编码168个氨基酸,所测序列与GenBank中已登录的安哥拉兔、中国白兔、欧洲兔、新西兰兔IFN-γ同源性为100%,与獭兔同源性高达99.8%.构建的重组菌经过IPTG诱导后,通过SDS-PAGE电泳证实,IFN-γ基因片段在大肠杆菌中得到了融合表达,分子质量约为18 ku,表达量为菌体总蛋白的35%左右.以上结果为下一阶段兔IFN-γ重组蛋白生物学特性及其应用的研究奠定了基础.
提取經ConA刺激後的日本大耳白兔外週血淋巴細胞總RNA,應用RT-PCR技術對其JFN-γ基因進行擴增和測序.將去除信號肽的IFN-γ基因片段插入原覈錶達載體pET-30a併在大腸桿菌中進行錶達.結果顯示,剋隆的JFN-γ基因長為504箇覈苷痠,具有一箇完整的開放閱讀框,編碼168箇氨基痠,所測序列與GenBank中已登錄的安哥拉兔、中國白兔、歐洲兔、新西蘭兔IFN-γ同源性為100%,與獺兔同源性高達99.8%.構建的重組菌經過IPTG誘導後,通過SDS-PAGE電泳證實,IFN-γ基因片段在大腸桿菌中得到瞭融閤錶達,分子質量約為18 ku,錶達量為菌體總蛋白的35%左右.以上結果為下一階段兔IFN-γ重組蛋白生物學特性及其應用的研究奠定瞭基礎.
제취경ConA자격후적일본대이백토외주혈림파세포총RNA,응용RT-PCR기술대기JFN-γ기인진행확증화측서.장거제신호태적IFN-γ기인편단삽입원핵표체재체pET-30a병재대장간균중진행표체.결과현시,극륭적JFN-γ기인장위504개핵감산,구유일개완정적개방열독광,편마168개안기산,소측서렬여GenBank중이등록적안가랍토、중국백토、구주토、신서란토IFN-γ동원성위100%,여달토동원성고체99.8%.구건적중조균경과IPTG유도후,통과SDS-PAGE전영증실,IFN-γ기인편단재대장간균중득도료융합표체,분자질량약위18 ku,표체량위균체총단백적35%좌우.이상결과위하일계단토IFN-γ중조단백생물학특성급기응용적연구전정료기출.
