湖北大学学报（自然科学版）
湖北大學學報（自然科學版）
호북대학학보（자연과학판）
2010年
3期
318-322
,共5页
秀丽隐杆线虫%基因敲除%筛选%PCR检测%sec-10
秀麗隱桿線蟲%基因敲除%篩選%PCR檢測%sec-10
수려은간선충%기인고제%사선%PCR검측%sec-10
从秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis ellegans)的基因突变库中筛选出目的基因的突变种系,并对其进行分子机制的研究,是研究不同基因及其蛋白产物作用机制的一项基本技术.以sec-10突变种系的成功筛选为例,详细描述如何通过PCR检测方法从笔者实验室所构建的国内第一个秀丽线虫基因敲除突变库(可进行多达几百次的筛选量)中筛选出目的基因的突变种系,同时证明突变库的可用性.根据sec-10基因序列设计多套针对不同靶点的含干扰引物的巢式引物,通过凝胶电泳正确判断扩增产物的特异性和干扰引物对长片段产物的抑制特性,以选择有效的检测引物.简化了线虫复苏后的饲养方法,以取代恒温恒湿培养箱的使用.通过纯和致死平衡子的引入,克服了sec-10基因突变致死所导致的无法稳定传代的问题.总结了从秀丽线虫基因突变库中筛选突变种系的注意要点,为国内其它线虫基因突变库的筛选提供重要的参考意见.
從秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditis ellegans)的基因突變庫中篩選齣目的基因的突變種繫,併對其進行分子機製的研究,是研究不同基因及其蛋白產物作用機製的一項基本技術.以sec-10突變種繫的成功篩選為例,詳細描述如何通過PCR檢測方法從筆者實驗室所構建的國內第一箇秀麗線蟲基因敲除突變庫(可進行多達幾百次的篩選量)中篩選齣目的基因的突變種繫,同時證明突變庫的可用性.根據sec-10基因序列設計多套針對不同靶點的含榦擾引物的巢式引物,通過凝膠電泳正確判斷擴增產物的特異性和榦擾引物對長片段產物的抑製特性,以選擇有效的檢測引物.簡化瞭線蟲複囌後的飼養方法,以取代恆溫恆濕培養箱的使用.通過純和緻死平衡子的引入,剋服瞭sec-10基因突變緻死所導緻的無法穩定傳代的問題.總結瞭從秀麗線蟲基因突變庫中篩選突變種繫的註意要點,為國內其它線蟲基因突變庫的篩選提供重要的參攷意見.
종수려은간선충(Caenorhabditis ellegans)적기인돌변고중사선출목적기인적돌변충계,병대기진행분자궤제적연구,시연구불동기인급기단백산물작용궤제적일항기본기술.이sec-10돌변충계적성공사선위례,상세묘술여하통과PCR검측방법종필자실험실소구건적국내제일개수려선충기인고제돌변고(가진행다체궤백차적사선량)중사선출목적기인적돌변충계,동시증명돌변고적가용성.근거sec-10기인서렬설계다투침대불동파점적함간우인물적소식인물,통과응효전영정학판단확증산물적특이성화간우인물대장편단산물적억제특성,이선택유효적검측인물.간화료선충복소후적사양방법,이취대항온항습배양상적사용.통과순화치사평형자적인입,극복료sec-10기인돌변치사소도치적무법은정전대적문제.총결료종수려선충기인돌변고중사선돌변충계적주의요점,위국내기타선충기인돌변고적사선제공중요적삼고의견.
