中国动物检疫
中國動物檢疫
중국동물검역
CHINA ANMAL QUARANTINE
2009年
7期
23-25
,共3页
赵永刚%田晓灵%宋厚辉%王志亮%吴树清
趙永剛%田曉靈%宋厚輝%王誌亮%吳樹清
조영강%전효령%송후휘%왕지량%오수청
小反刍兽疫病毒%F基因%原核表达%抗原位点
小反芻獸疫病毒%F基因%原覈錶達%抗原位點
소반추수역병독%F기인%원핵표체%항원위점
目的表达小反刍兽疫F蛋白的抗原位点用于检测与预防.方法用DNAstar分析小反刍兽疫的抗原位点,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中PPRV的F基因的抗原位点并克隆到原核表达载体PET-28b中,最后用PCR、酶切和测序分析对重组质粒进行鉴定;将重组质粒转化到大肠杆茵Rosetta中,经ITPG诱导表达PPRV F基因的抗原位点;用SDS-PAGE和Western-Blotting分析抗原位点蛋白的表达.结果将RT-PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段;对重组质粒PET-28b-F35-111(pZLW013)、PET-28b-F143-485(pZLW014)和PET-28b-F323-485(pZLW015)酶切后,均出现与预期相符的片段;DNA测序表明插入的片段的序列与小反刍兽疫F基因的抗原位点序列分别完全一致,其大小分别为251bp、1053bp和514bp;将重组表达的蛋白经SDS-PAGE和Western-Blotting分析,证明小反刍兽疫抗原位点F35-111没有表达、抗原位点F143-485和F323-485得到表达.结论成功表达了PPRV F基因的两段抗原位点蛋白,为日后检测与预防工作奠定了基础.
目的錶達小反芻獸疫F蛋白的抗原位點用于檢測與預防.方法用DNAstar分析小反芻獸疫的抗原位點,採用逆轉錄聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)技術,從病羊組織中PPRV的F基因的抗原位點併剋隆到原覈錶達載體PET-28b中,最後用PCR、酶切和測序分析對重組質粒進行鑒定;將重組質粒轉化到大腸桿茵Rosetta中,經ITPG誘導錶達PPRV F基因的抗原位點;用SDS-PAGE和Western-Blotting分析抗原位點蛋白的錶達.結果將RT-PCR產物電泳,得到與預期大小相符的特異性片段;對重組質粒PET-28b-F35-111(pZLW013)、PET-28b-F143-485(pZLW014)和PET-28b-F323-485(pZLW015)酶切後,均齣現與預期相符的片段;DNA測序錶明插入的片段的序列與小反芻獸疫F基因的抗原位點序列分彆完全一緻,其大小分彆為251bp、1053bp和514bp;將重組錶達的蛋白經SDS-PAGE和Western-Blotting分析,證明小反芻獸疫抗原位點F35-111沒有錶達、抗原位點F143-485和F323-485得到錶達.結論成功錶達瞭PPRV F基因的兩段抗原位點蛋白,為日後檢測與預防工作奠定瞭基礎.
목적표체소반추수역F단백적항원위점용우검측여예방.방법용DNAstar분석소반추수역적항원위점,채용역전록취합매련식반응(RT-PCR)기술,종병양조직중PPRV적F기인적항원위점병극륭도원핵표체재체PET-28b중,최후용PCR、매절화측서분석대중조질립진행감정;장중조질립전화도대장간인Rosetta중,경ITPG유도표체PPRV F기인적항원위점;용SDS-PAGE화Western-Blotting분석항원위점단백적표체.결과장RT-PCR산물전영,득도여예기대소상부적특이성편단;대중조질립PET-28b-F35-111(pZLW013)、PET-28b-F143-485(pZLW014)화PET-28b-F323-485(pZLW015)매절후,균출현여예기상부적편단;DNA측서표명삽입적편단적서렬여소반추수역F기인적항원위점서렬분별완전일치,기대소분별위251bp、1053bp화514bp;장중조표체적단백경SDS-PAGE화Western-Blotting분석,증명소반추수역항원위점F35-111몰유표체、항원위점F143-485화F323-485득도표체.결론성공표체료PPRV F기인적량단항원위점단백,위일후검측여예방공작전정료기출.
