生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2008年
z1期
393-396
,共4页
元冬娟%吴湃%熊继红%周克元%江黎明
元鼕娟%吳湃%熊繼紅%週剋元%江黎明
원동연%오배%웅계홍%주극원%강려명
蓖麻△9脂肪酸去饱和酶%线虫fat-1脂肪酸去饱和酶%原核表达
蓖痳△9脂肪痠去飽和酶%線蟲fat-1脂肪痠去飽和酶%原覈錶達
비마△9지방산거포화매%선충fat-1지방산거포화매%원핵표체
目的:通过在原核表达系统中表达蓖麻的可溶性脂肪酸去饱和酶基因和线虫的fat-1脂肪酸去饱和酶基因,为脂肪酸去饱和酶序列结构与功能的研究奠定基础.方法:将蓖麻RCD△9脂肪酸去饱和酶和线虫fat-1脂肪酸去饱和酶基因亚克隆到大肠杆菌BL21表达载体pET32a+中,获得重组表达载体pET32a+-R9,pET32a+-F1,并通过SDS-PAGE和western Blotting鉴定蛋白的表达情况.结果:经PCR和测序鉴定,证实两个重组质粒含有目的基因片段;SDS-PAGE和Western Blotting证实两种蛋白在大肠杆菌中获得表达,但表达量具有明显的不同;An thepro软件对蛋白跨膜结构的分析,验证蓖麻△9脂肪酸去饱和酶和线虫fat-1脂肪酸去饱和酶在结构上的不同.结论:蓖麻的RCD脂肪酸去饱和酶和线虫的fat-1脂肪酸去饱和酶都得到了表达,但线虫fat-1脂肪酸去饱和酶表达量偏低;这可能与fat-1脂肪酸去饱和酶是一类跨膜蛋白的性质直接相关.因此,对于线虫fat-1脂肪酸去饱和酶的基于蛋白纯化的结构分析有待进一步的研究.
目的:通過在原覈錶達繫統中錶達蓖痳的可溶性脂肪痠去飽和酶基因和線蟲的fat-1脂肪痠去飽和酶基因,為脂肪痠去飽和酶序列結構與功能的研究奠定基礎.方法:將蓖痳RCD△9脂肪痠去飽和酶和線蟲fat-1脂肪痠去飽和酶基因亞剋隆到大腸桿菌BL21錶達載體pET32a+中,穫得重組錶達載體pET32a+-R9,pET32a+-F1,併通過SDS-PAGE和western Blotting鑒定蛋白的錶達情況.結果:經PCR和測序鑒定,證實兩箇重組質粒含有目的基因片段;SDS-PAGE和Western Blotting證實兩種蛋白在大腸桿菌中穫得錶達,但錶達量具有明顯的不同;An thepro軟件對蛋白跨膜結構的分析,驗證蓖痳△9脂肪痠去飽和酶和線蟲fat-1脂肪痠去飽和酶在結構上的不同.結論:蓖痳的RCD脂肪痠去飽和酶和線蟲的fat-1脂肪痠去飽和酶都得到瞭錶達,但線蟲fat-1脂肪痠去飽和酶錶達量偏低;這可能與fat-1脂肪痠去飽和酶是一類跨膜蛋白的性質直接相關.因此,對于線蟲fat-1脂肪痠去飽和酶的基于蛋白純化的結構分析有待進一步的研究.
목적:통과재원핵표체계통중표체비마적가용성지방산거포화매기인화선충적fat-1지방산거포화매기인,위지방산거포화매서렬결구여공능적연구전정기출.방법:장비마RCD△9지방산거포화매화선충fat-1지방산거포화매기인아극륭도대장간균BL21표체재체pET32a+중,획득중조표체재체pET32a+-R9,pET32a+-F1,병통과SDS-PAGE화western Blotting감정단백적표체정황.결과:경PCR화측서감정,증실량개중조질립함유목적기인편단;SDS-PAGE화Western Blotting증실량충단백재대장간균중획득표체,단표체량구유명현적불동;An thepro연건대단백과막결구적분석,험증비마△9지방산거포화매화선충fat-1지방산거포화매재결구상적불동.결론:비마적RCD지방산거포화매화선충적fat-1지방산거포화매도득도료표체,단선충fat-1지방산거포화매표체량편저;저가능여fat-1지방산거포화매시일류과막단백적성질직접상관.인차,대우선충fat-1지방산거포화매적기우단백순화적결구분석유대진일보적연구.
