畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2008年
12期
1-5
,共5页
李敏%陈彦希%代淑燕%刘忠伟%周碧君%文明
李敏%陳彥希%代淑燕%劉忠偉%週碧君%文明
리민%진언희%대숙연%류충위%주벽군%문명
鸭肠炎病毒%核衣壳蛋白%原核表达%间接ELISA
鴨腸炎病毒%覈衣殼蛋白%原覈錶達%間接ELISA
압장염병독%핵의각단백%원핵표체%간접ELISA
设计一对特异性引物扩增出鸭肠炎病毒(DEV)核衣壳蛋白(NP)基因,并将其定向插入到原核表达载体pET32a上,构建了NP基因的原核表达载体pET-NP;将重组载体pET-NP转化表达宿主菌BL21后,经SDS-PAGE分离后行Western blot显示.获得的表达产物具有良好的免疫原性;应用His.Bind亲和层析柱纯化重组NP蛋白,并以此作为包被抗原.初步建立了检测鸭肠炎病毒抗体的iNP-ELISA;经方阵滴定确定,重组蛋白抗原的最佳包被浓度为5.0μg/L,血清最佳稀释度为1:80,阳性判定标准为:待检血清OD405值≥1.2,且待检血清OD405和阴性血清OD405的比值≥2.0;应用iNP-ELISA对450份鸭血清样本进行检测,结果iNP-ELISA与全病毒包被的iDEV-ELISA符合率达90.9%.
設計一對特異性引物擴增齣鴨腸炎病毒(DEV)覈衣殼蛋白(NP)基因,併將其定嚮插入到原覈錶達載體pET32a上,構建瞭NP基因的原覈錶達載體pET-NP;將重組載體pET-NP轉化錶達宿主菌BL21後,經SDS-PAGE分離後行Western blot顯示.穫得的錶達產物具有良好的免疫原性;應用His.Bind親和層析柱純化重組NP蛋白,併以此作為包被抗原.初步建立瞭檢測鴨腸炎病毒抗體的iNP-ELISA;經方陣滴定確定,重組蛋白抗原的最佳包被濃度為5.0μg/L,血清最佳稀釋度為1:80,暘性判定標準為:待檢血清OD405值≥1.2,且待檢血清OD405和陰性血清OD405的比值≥2.0;應用iNP-ELISA對450份鴨血清樣本進行檢測,結果iNP-ELISA與全病毒包被的iDEV-ELISA符閤率達90.9%.
설계일대특이성인물확증출압장염병독(DEV)핵의각단백(NP)기인,병장기정향삽입도원핵표체재체pET32a상,구건료NP기인적원핵표체재체pET-NP;장중조재체pET-NP전화표체숙주균BL21후,경SDS-PAGE분리후행Western blot현시.획득적표체산물구유량호적면역원성;응용His.Bind친화층석주순화중조NP단백,병이차작위포피항원.초보건립료검측압장염병독항체적iNP-ELISA;경방진적정학정,중조단백항원적최가포피농도위5.0μg/L,혈청최가희석도위1:80,양성판정표준위:대검혈청OD405치≥1.2,차대검혈청OD405화음성혈청OD405적비치≥2.0;응용iNP-ELISA대450빈압혈청양본진행검측,결과iNP-ELISA여전병독포피적iDEV-ELISA부합솔체90.9%.
