畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2008年
11期
1554-1561
,共8页
戈胜强%柴同杰%马保臣%李晓霞%蔡玉梅%吕静%乔孛贩%王炳晓
戈勝彊%柴同傑%馬保臣%李曉霞%蔡玉梅%呂靜%喬孛販%王炳曉
과성강%시동걸%마보신%리효하%채옥매%려정%교패판%왕병효
奶牛乳腺炎%细菌%真菌%双重PCR
奶牛乳腺炎%細菌%真菌%雙重PCR
내우유선염%세균%진균%쌍중PCR
综合多种细菌、真菌DNA模板的提取方法,采用β-巯基乙醇裂解细胞壁,利用蜗牛酶和溶菌酶消化细胞壁,再利用石英砂机械破壁,能彻底破坏细菌、真菌细胞壁,提取高质量的DNA,摸索出一套从奶样中同时提取细菌、真菌核酸的新方法.建立双重PCR方法,同时完成对细菌16S rRNA保守区特异性基因片段和真菌18S rRNA保守区特异性基因片段的扩增,快速诊断奶牛乳房炎是细菌感染还是真菌感染或是混合感染.对采自临床型乳腺炎和隐性乳腺炎病例的共计84个乳样分别用传统细菌学培养法和双重PCR方法对比鉴定.结果表明,双重PCR检测乳样细菌的最小浓度为102 CFU/mL,检测乳样真菌的最小浓度为103 CFU/mL.双重PCR方法对细菌的检测与平板培养检测方法比较差异不显著(P>0.05),对真菌的检测与平板培养检测方法比较具有更高的检出率(P<0.01).
綜閤多種細菌、真菌DNA模闆的提取方法,採用β-巰基乙醇裂解細胞壁,利用蝸牛酶和溶菌酶消化細胞壁,再利用石英砂機械破壁,能徹底破壞細菌、真菌細胞壁,提取高質量的DNA,摸索齣一套從奶樣中同時提取細菌、真菌覈痠的新方法.建立雙重PCR方法,同時完成對細菌16S rRNA保守區特異性基因片段和真菌18S rRNA保守區特異性基因片段的擴增,快速診斷奶牛乳房炎是細菌感染還是真菌感染或是混閤感染.對採自臨床型乳腺炎和隱性乳腺炎病例的共計84箇乳樣分彆用傳統細菌學培養法和雙重PCR方法對比鑒定.結果錶明,雙重PCR檢測乳樣細菌的最小濃度為102 CFU/mL,檢測乳樣真菌的最小濃度為103 CFU/mL.雙重PCR方法對細菌的檢測與平闆培養檢測方法比較差異不顯著(P>0.05),對真菌的檢測與平闆培養檢測方法比較具有更高的檢齣率(P<0.01).
종합다충세균、진균DNA모판적제취방법,채용β-구기을순렬해세포벽,이용와우매화용균매소화세포벽,재이용석영사궤계파벽,능철저파배세균、진균세포벽,제취고질량적DNA,모색출일투종내양중동시제취세균、진균핵산적신방법.건립쌍중PCR방법,동시완성대세균16S rRNA보수구특이성기인편단화진균18S rRNA보수구특이성기인편단적확증,쾌속진단내우유방염시세균감염환시진균감염혹시혼합감염.대채자림상형유선염화은성유선염병례적공계84개유양분별용전통세균학배양법화쌍중PCR방법대비감정.결과표명,쌍중PCR검측유양세균적최소농도위102 CFU/mL,검측유양진균적최소농도위103 CFU/mL.쌍중PCR방법대세균적검측여평판배양검측방법비교차이불현저(P>0.05),대진균적검측여평판배양검측방법비교구유경고적검출솔(P<0.01).
