中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2008年
43期
8529-8534
,共6页
张斌%刘瑞%朱希山%豆晓伟%刘星霞%陈媛%赵春华
張斌%劉瑞%硃希山%豆曉偉%劉星霞%陳媛%趙春華
장빈%류서%주희산%두효위%류성하%진원%조춘화
骨髓间充质干细胞%成骨%干扰素γ%免疫调节活性
骨髓間充質榦細胞%成骨%榦擾素γ%免疫調節活性
골수간충질간세포%성골%간우소γ%면역조절활성
背景:骨髓间充质干细胞在修复异基因组织最终分化为特定细胞后,理论上会因MHC及共刺激分子上调而引起组织排斥,但实际上并没有发生排斥反应.推测骨髓间充质干细胞在异荩因组织分化诱导及炎性因子微环境作用下,有可能分化成一种仍具有免疫调节活性的终末细胞,不被机体的免疫识别系统清除掉.目的:在体外运用成骨诱导及干扰素γ预处理来模拟体内组织分化及炎性因子微环境,观察在此作用下胎几骨髓源Flk-1+间充质干细胞是否能够保持其在自然条件下所呈现的免疫学活性.设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007 09/2008-05在北京协和医学院基础学院完成.材料:2例骨髓样品取自流产胎儿,由北京回龙冠妇产医院提供.外周血样品取自15～35岁健康志愿者,由北京三○七医院提供.地塞米松等诱导因子和干扰素γ为美国Sigma公司产品.方法:Ficoll法分离胎儿骨髓单个核细胞,取白环层以上细胞,以1×106/cm2密度接种,贴壁法纯化,采用阴性分选法去除CD45+ 、G1yA+ 和CD34+ 细胞,分离扩增得到F1k-1+骨髓间充质干细胞.以淋巴细胞分离液梯度离心分离外周血单个核细胞,用于混合淋巴细胞培养实验及有丝分裂原刺激的淋巴细胞增殖实验.主要观察指标:流式细胞仪鉴定细胞表型,用成骨、成脂、成软骨和成内皮诱导液检测其分化潜能,成骨诱导或干扰素γ预处理后细胞表面抗原表达、对淋巴细胞增殖及活化抗原CD69、CD25表达的影响,对臼细胞介素10和转化生长因子β分秘水平的影响.结果:光镜下骨髓来源的间充质干细胞为成纤维细胞样贴擘牛长,均高表达Flk-1,同时高表达黏附分子CD29、CD44、CD105,造血细胞标志CD34、CD45呈阴性:可向成骨、成脂肪、成软骨和成内皮方向分化:低表达MHC-1类分子,不表达MHC-Ⅱ类分子,成骨诱导能上调MHC-1表达,干扰素γ预处理可上调MHC-Ⅱ表达.骨髓源Flk-1+间充质干细胞经成骨诱导 7d 或干扰素γ预处理48 h后,仍呈低免疫原性,不激发异基因淋巴细胞增殖,抑制植物血凝素刺激的淋巴细胞增殖效果明显增强(t=2.57,P＜0.05),可进.步抑制CD69和CD25的表达,ELISA检测显示其培养卜清分泌白细胞介素10水平增强(t=2.66,P＜0.05),但分泌转化生长因子βB水平经成骨诱导后无明显变化,干扰素γ预处理后则明显升高.结论:经成骨诱导或干扰素γ预处理后,骨髓源Flk-1+间充质干细胞仍能保持低免疫原性,且免疫调节活性进一步提高.
揹景:骨髓間充質榦細胞在脩複異基因組織最終分化為特定細胞後,理論上會因MHC及共刺激分子上調而引起組織排斥,但實際上併沒有髮生排斥反應.推測骨髓間充質榦細胞在異藎因組織分化誘導及炎性因子微環境作用下,有可能分化成一種仍具有免疫調節活性的終末細胞,不被機體的免疫識彆繫統清除掉.目的:在體外運用成骨誘導及榦擾素γ預處理來模擬體內組織分化及炎性因子微環境,觀察在此作用下胎幾骨髓源Flk-1+間充質榦細胞是否能夠保持其在自然條件下所呈現的免疫學活性.設計、時間及地點:細胞學體外對照觀察,于2007 09/2008-05在北京協和醫學院基礎學院完成.材料:2例骨髓樣品取自流產胎兒,由北京迴龍冠婦產醫院提供.外週血樣品取自15～35歲健康誌願者,由北京三○七醫院提供.地塞米鬆等誘導因子和榦擾素γ為美國Sigma公司產品.方法:Ficoll法分離胎兒骨髓單箇覈細胞,取白環層以上細胞,以1×106/cm2密度接種,貼壁法純化,採用陰性分選法去除CD45+ 、G1yA+ 和CD34+ 細胞,分離擴增得到F1k-1+骨髓間充質榦細胞.以淋巴細胞分離液梯度離心分離外週血單箇覈細胞,用于混閤淋巴細胞培養實驗及有絲分裂原刺激的淋巴細胞增殖實驗.主要觀察指標:流式細胞儀鑒定細胞錶型,用成骨、成脂、成軟骨和成內皮誘導液檢測其分化潛能,成骨誘導或榦擾素γ預處理後細胞錶麵抗原錶達、對淋巴細胞增殖及活化抗原CD69、CD25錶達的影響,對臼細胞介素10和轉化生長因子β分祕水平的影響.結果:光鏡下骨髓來源的間充質榦細胞為成纖維細胞樣貼擘牛長,均高錶達Flk-1,同時高錶達黏附分子CD29、CD44、CD105,造血細胞標誌CD34、CD45呈陰性:可嚮成骨、成脂肪、成軟骨和成內皮方嚮分化:低錶達MHC-1類分子,不錶達MHC-Ⅱ類分子,成骨誘導能上調MHC-1錶達,榦擾素γ預處理可上調MHC-Ⅱ錶達.骨髓源Flk-1+間充質榦細胞經成骨誘導 7d 或榦擾素γ預處理48 h後,仍呈低免疫原性,不激髮異基因淋巴細胞增殖,抑製植物血凝素刺激的淋巴細胞增殖效果明顯增彊(t=2.57,P＜0.05),可進.步抑製CD69和CD25的錶達,ELISA檢測顯示其培養蔔清分泌白細胞介素10水平增彊(t=2.66,P＜0.05),但分泌轉化生長因子βB水平經成骨誘導後無明顯變化,榦擾素γ預處理後則明顯升高.結論:經成骨誘導或榦擾素γ預處理後,骨髓源Flk-1+間充質榦細胞仍能保持低免疫原性,且免疫調節活性進一步提高.
배경:골수간충질간세포재수복이기인조직최종분화위특정세포후,이론상회인MHC급공자격분자상조이인기조직배척,단실제상병몰유발생배척반응.추측골수간충질간세포재이신인조직분화유도급염성인자미배경작용하,유가능분화성일충잉구유면역조절활성적종말세포,불피궤체적면역식별계통청제도.목적:재체외운용성골유도급간우소γ예처리래모의체내조직분화급염성인자미배경,관찰재차작용하태궤골수원Flk-1+간충질간세포시부능구보지기재자연조건하소정현적면역학활성.설계、시간급지점:세포학체외대조관찰,우2007 09/2008-05재북경협화의학원기출학원완성.재료:2례골수양품취자유산태인,유북경회룡관부산의원제공.외주혈양품취자15～35세건강지원자,유북경삼○칠의원제공.지새미송등유도인자화간우소γ위미국Sigma공사산품.방법:Ficoll법분리태인골수단개핵세포,취백배층이상세포,이1×106/cm2밀도접충,첩벽법순화,채용음성분선법거제CD45+ 、G1yA+ 화CD34+ 세포,분리확증득도F1k-1+골수간충질간세포.이림파세포분리액제도리심분리외주혈단개핵세포,용우혼합림파세포배양실험급유사분렬원자격적림파세포증식실험.주요관찰지표:류식세포의감정세포표형,용성골、성지、성연골화성내피유도액검측기분화잠능,성골유도혹간우소γ예처리후세포표면항원표체、대림파세포증식급활화항원CD69、CD25표체적영향,대구세포개소10화전화생장인자β분비수평적영향.결과:광경하골수래원적간충질간세포위성섬유세포양첩벽우장,균고표체Flk-1,동시고표체점부분자CD29、CD44、CD105,조혈세포표지CD34、CD45정음성:가향성골、성지방、성연골화성내피방향분화:저표체MHC-1류분자,불표체MHC-Ⅱ류분자,성골유도능상조MHC-1표체,간우소γ예처리가상조MHC-Ⅱ표체.골수원Flk-1+간충질간세포경성골유도 7d 혹간우소γ예처리48 h후,잉정저면역원성,불격발이기인림파세포증식,억제식물혈응소자격적림파세포증식효과명현증강(t=2.57,P＜0.05),가진.보억제CD69화CD25적표체,ELISA검측현시기배양복청분비백세포개소10수평증강(t=2.66,P＜0.05),단분비전화생장인자βB수평경성골유도후무명현변화,간우소γ예처리후칙명현승고.결론:경성골유도혹간우소γ예처리후,골수원Flk-1+간충질간세포잉능보지저면역원성,차면역조절활성진일보제고.
