医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2008年
6期
493-497
,共5页
谭力%缪洪明%甘立霞%卢忠燕%陈姗
譚力%繆洪明%甘立霞%盧忠燕%陳姍
담력%무홍명%감립하%로충연%진산
单核细胞趋化蛋白1%糖尿病肾病%腺病毒介导%体外迁移能力
單覈細胞趨化蛋白1%糖尿病腎病%腺病毒介導%體外遷移能力
단핵세포추화단백1%당뇨병신병%선병독개도%체외천이능력
目的 构建针对单核细胞趋化蛋白1(monoeyte chemoattractant protein 1,MCP-1)基因的小分子干扰RNA(siRNA)重组腺病毒,探讨干扰MCP-1表达对人单核细胞白血病株THP-1迁移能力的影响.方法 设计并合成针对人MCP-1的siRNA的靶DNA序列,克隆于穿梭载体pAdTrack-CMV中,与带有腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的BJ5183细菌中进行同源重组,获得重组腺病毒载体pAdeasy-si-MCP-1,转染人胚肾细胞株293细胞,包装并扩增病毒颗粒.体外感染能表达MCP-1的293细胞,RT-PCR检测siRNA对MCP-1转录水平影响.Millicell细胞迁移实验检测对人单核细胞白血病株THP-1体外迁移能力的影响.结果 高糖诱导下,人293细胞MCP-1的表达增强;而Ad-si-MCP-1感染后,能够显著抑制高糖刺激的MCP-1 mR-NA水平的升高;Ad-si-MCP-1感染293细胞后的培养上清对THP-1的趋化作用较高糖刺激组及其siRNA阴性对照组显著降低.结论 成功构建了抑制MCP-1表达的siRNA腺病毒载体,其抑制MCP-1表达可明显抑制高糖诱导的THP-1的趋化作用,提示MCP-1表达的干预可能为糖尿病肾病等MCP-1相关疾病提供新的预防和治疗手段.
目的 構建針對單覈細胞趨化蛋白1(monoeyte chemoattractant protein 1,MCP-1)基因的小分子榦擾RNA(siRNA)重組腺病毒,探討榦擾MCP-1錶達對人單覈細胞白血病株THP-1遷移能力的影響.方法 設計併閤成針對人MCP-1的siRNA的靶DNA序列,剋隆于穿梭載體pAdTrack-CMV中,與帶有腺病毒骨架質粒pAdeasy-1的BJ5183細菌中進行同源重組,穫得重組腺病毒載體pAdeasy-si-MCP-1,轉染人胚腎細胞株293細胞,包裝併擴增病毒顆粒.體外感染能錶達MCP-1的293細胞,RT-PCR檢測siRNA對MCP-1轉錄水平影響.Millicell細胞遷移實驗檢測對人單覈細胞白血病株THP-1體外遷移能力的影響.結果 高糖誘導下,人293細胞MCP-1的錶達增彊;而Ad-si-MCP-1感染後,能夠顯著抑製高糖刺激的MCP-1 mR-NA水平的升高;Ad-si-MCP-1感染293細胞後的培養上清對THP-1的趨化作用較高糖刺激組及其siRNA陰性對照組顯著降低.結論 成功構建瞭抑製MCP-1錶達的siRNA腺病毒載體,其抑製MCP-1錶達可明顯抑製高糖誘導的THP-1的趨化作用,提示MCP-1錶達的榦預可能為糖尿病腎病等MCP-1相關疾病提供新的預防和治療手段.
목적 구건침대단핵세포추화단백1(monoeyte chemoattractant protein 1,MCP-1)기인적소분자간우RNA(siRNA)중조선병독,탐토간우MCP-1표체대인단핵세포백혈병주THP-1천이능력적영향.방법 설계병합성침대인MCP-1적siRNA적파DNA서렬,극륭우천사재체pAdTrack-CMV중,여대유선병독골가질립pAdeasy-1적BJ5183세균중진행동원중조,획득중조선병독재체pAdeasy-si-MCP-1,전염인배신세포주293세포,포장병확증병독과립.체외감염능표체MCP-1적293세포,RT-PCR검측siRNA대MCP-1전록수평영향.Millicell세포천이실험검측대인단핵세포백혈병주THP-1체외천이능력적영향.결과 고당유도하,인293세포MCP-1적표체증강;이Ad-si-MCP-1감염후,능구현저억제고당자격적MCP-1 mR-NA수평적승고;Ad-si-MCP-1감염293세포후적배양상청대THP-1적추화작용교고당자격조급기siRNA음성대조조현저강저.결론 성공구건료억제MCP-1표체적siRNA선병독재체,기억제MCP-1표체가명현억제고당유도적THP-1적추화작용,제시MCP-1표체적간예가능위당뇨병신병등MCP-1상관질병제공신적예방화치료수단.
