生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
7期
1186-1193
,共8页
黄秀东%Shusheng Wang%陈佩新%Jun Wang%陈耀国%Xuegong Pan%曹之舫
黃秀東%Shusheng Wang%陳珮新%Jun Wang%陳耀國%Xuegong Pan%曹之舫
황수동%Shusheng Wang%진패신%Jun Wang%진요국%Xuegong Pan%조지방
激肽释放酶%毕赤酵母%重组蛋白%S-2266生色底物
激肽釋放酶%畢赤酵母%重組蛋白%S-2266生色底物
격태석방매%필적효모%중조단백%S-2266생색저물
将自肾脏cDNA中获得的人激肽释放酶-1(Human kallikrein 1,hKl)基因插入到pPICZaA载体中,构建甲醇酵母分泌型表达载体pPICZα-hK1,该载体转化毕赤酵母(Pichia pastoris)宿主茵X33,通过提高YPD平板和培养液中抗生素Zeocin的浓度(500～700μg/mL),筛选能高水平表达重组人激肽释放酶-1(Recombinant human kallikrein 1,rhK1)的P.pastoris程菌株.在30L发酵罐中发酵的表达条件为30℃、pH 6.0,诱导64h时,发酵上清中rhK1产量达到6500μ/L(约1.25 g/L).表达的rhK1有N-型糖基化程度不同的两种类型,分别是分子量偏大的rhK1-H和分子量略小的rhK1-L.通过苯基疏水作用、Cu2+螯合以及阴离子交换层析纯化,从每升发酵上清中可获得0.28 g的rhK1-H和0.62 g的rhK1-L.纯化的总得率约为72%,纯度不低于96%.到目前为止,该研究获得的rhK1产量高于其他研究者的结果.
將自腎髒cDNA中穫得的人激肽釋放酶-1(Human kallikrein 1,hKl)基因插入到pPICZaA載體中,構建甲醇酵母分泌型錶達載體pPICZα-hK1,該載體轉化畢赤酵母(Pichia pastoris)宿主茵X33,通過提高YPD平闆和培養液中抗生素Zeocin的濃度(500～700μg/mL),篩選能高水平錶達重組人激肽釋放酶-1(Recombinant human kallikrein 1,rhK1)的P.pastoris程菌株.在30L髮酵罐中髮酵的錶達條件為30℃、pH 6.0,誘導64h時,髮酵上清中rhK1產量達到6500μ/L(約1.25 g/L).錶達的rhK1有N-型糖基化程度不同的兩種類型,分彆是分子量偏大的rhK1-H和分子量略小的rhK1-L.通過苯基疏水作用、Cu2+螯閤以及陰離子交換層析純化,從每升髮酵上清中可穫得0.28 g的rhK1-H和0.62 g的rhK1-L.純化的總得率約為72%,純度不低于96%.到目前為止,該研究穫得的rhK1產量高于其他研究者的結果.
장자신장cDNA중획득적인격태석방매-1(Human kallikrein 1,hKl)기인삽입도pPICZaA재체중,구건갑순효모분비형표체재체pPICZα-hK1,해재체전화필적효모(Pichia pastoris)숙주인X33,통과제고YPD평판화배양액중항생소Zeocin적농도(500～700μg/mL),사선능고수평표체중조인격태석방매-1(Recombinant human kallikrein 1,rhK1)적P.pastoris정균주.재30L발효관중발효적표체조건위30℃、pH 6.0,유도64h시,발효상청중rhK1산량체도6500μ/L(약1.25 g/L).표체적rhK1유N-형당기화정도불동적량충류형,분별시분자량편대적rhK1-H화분자량략소적rhK1-L.통과분기소수작용、Cu2+오합이급음리자교환층석순화,종매승발효상청중가획득0.28 g적rhK1-H화0.62 g적rhK1-L.순화적총득솔약위72%,순도불저우96%.도목전위지,해연구획득적rhK1산량고우기타연구자적결과.
