分子植物育种
分子植物育種
분자식물육충
MOLECULAR PLANT BREEDING
2008年
4期
775-780
,共6页
张勇%付绍红%张汝全%牛应泽
張勇%付紹紅%張汝全%牛應澤
장용%부소홍%장여전%우응택
甘蓝型油菜%PEPC基因%ihpRNA载体%Napin启动子
甘藍型油菜%PEPC基因%ihpRNA載體%Napin啟動子
감람형유채%PEPC기인%ihpRNA재체%Napin계동자
为了通过转基因途径获得油菜种子中PEPC基因发生转录后基因沉默,通过PCR扩增分别分离得到了甘蓝型油菜种子特异性表达的Napin启动子序列(1 138 bp)和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因保守序列(181 bp),将它们分别克隆到pMD18-T载体中,利用中间载体pBS-NEI构建了PEPC基因的反向重复框.再将PEPC基因片段以正向的方式连接到一个可剪切的内含子5'末端,以反向的方式连接到该内含子的3'末端:然后将Napin启动子序列克隆到植物表达载体pCAMBIA1391的pUC18多克隆位点上,获得了种子特异表达的载体pCAMNapin;再将PEPase基因的反向重复序列克隆到pCAMNapin载体Napin启动子的3'末端,构建了具有种子特异性表达的PEPC基因的ihpRNA表达载体pCAMNapin-B2-NEI-B1.通过限制性内切酶酶切对载体作了鉴定分析.
為瞭通過轉基因途徑穫得油菜種子中PEPC基因髮生轉錄後基因沉默,通過PCR擴增分彆分離得到瞭甘藍型油菜種子特異性錶達的Napin啟動子序列(1 138 bp)和燐痠烯醇式丙酮痠羧化酶(PEPC)基因保守序列(181 bp),將它們分彆剋隆到pMD18-T載體中,利用中間載體pBS-NEI構建瞭PEPC基因的反嚮重複框.再將PEPC基因片段以正嚮的方式連接到一箇可剪切的內含子5'末耑,以反嚮的方式連接到該內含子的3'末耑:然後將Napin啟動子序列剋隆到植物錶達載體pCAMBIA1391的pUC18多剋隆位點上,穫得瞭種子特異錶達的載體pCAMNapin;再將PEPase基因的反嚮重複序列剋隆到pCAMNapin載體Napin啟動子的3'末耑,構建瞭具有種子特異性錶達的PEPC基因的ihpRNA錶達載體pCAMNapin-B2-NEI-B1.通過限製性內切酶酶切對載體作瞭鑒定分析.
위료통과전기인도경획득유채충자중PEPC기인발생전록후기인침묵,통과PCR확증분별분리득도료감람형유채충자특이성표체적Napin계동자서렬(1 138 bp)화린산희순식병동산최화매(PEPC)기인보수서렬(181 bp),장타문분별극륭도pMD18-T재체중,이용중간재체pBS-NEI구건료PEPC기인적반향중복광.재장PEPC기인편단이정향적방식련접도일개가전절적내함자5'말단,이반향적방식련접도해내함자적3'말단:연후장Napin계동자서렬극륭도식물표체재체pCAMBIA1391적pUC18다극륭위점상,획득료충자특이표체적재체pCAMNapin;재장PEPase기인적반향중복서렬극륭도pCAMNapin재체Napin계동자적3'말단,구건료구유충자특이성표체적PEPC기인적ihpRNA표체재체pCAMNapin-B2-NEI-B1.통과한제성내절매매절대재체작료감정분석.
