细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
1期
3-5
,共3页
Syk%真核表达%乳腺癌细胞%MHC-Ⅰ
Syk%真覈錶達%乳腺癌細胞%MHC-Ⅰ
Syk%진핵표체%유선암세포%MHC-Ⅰ
目的:构建非受体蛋白酪氨酸激酶Syk的真核表达载体,转染人乳腺癌细胞,使其在细胞中稳定表达,以研究Syk对人乳腺癌细胞MHC-Ⅰ类分子表达的影响.方法:以RTPCR法从人乳腺癌细胞株MDA-MB-468扩增出syk编码序列基因片段,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1D/V5-His-TOPO中.对重组质粒进行酶切、PCR及测序鉴定后,以脂质体介导法转染Syk缺失的人乳腺癌细胞MDA-MB-231,经G418筛选,构建syk基因稳定表达的细胞株,通过Western blot、RT-PCR和流式细胞术检测转染乳腺癌细胞Syk、MHC-Ⅰ及ICAM-Ⅰ的表达.结果:构建了hsyk真核表达载体pcDNA3.1D/V5-His-TOPO/hsyk,并在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中获得稳定表达.表达Syk的MDA-MB-231细胞同时可以高表达MHC-Ⅰ和ICAM-Ⅰ.结论:成功地构建了syk真核表达载体并在真核细胞中表达,为进一步的肿瘤免疫研究奠定了实验基础.
目的:構建非受體蛋白酪氨痠激酶Syk的真覈錶達載體,轉染人乳腺癌細胞,使其在細胞中穩定錶達,以研究Syk對人乳腺癌細胞MHC-Ⅰ類分子錶達的影響.方法:以RTPCR法從人乳腺癌細胞株MDA-MB-468擴增齣syk編碼序列基因片段,將其剋隆到真覈錶達載體pcDNA3.1D/V5-His-TOPO中.對重組質粒進行酶切、PCR及測序鑒定後,以脂質體介導法轉染Syk缺失的人乳腺癌細胞MDA-MB-231,經G418篩選,構建syk基因穩定錶達的細胞株,通過Western blot、RT-PCR和流式細胞術檢測轉染乳腺癌細胞Syk、MHC-Ⅰ及ICAM-Ⅰ的錶達.結果:構建瞭hsyk真覈錶達載體pcDNA3.1D/V5-His-TOPO/hsyk,併在人乳腺癌細胞MDA-MB-231中穫得穩定錶達.錶達Syk的MDA-MB-231細胞同時可以高錶達MHC-Ⅰ和ICAM-Ⅰ.結論:成功地構建瞭syk真覈錶達載體併在真覈細胞中錶達,為進一步的腫瘤免疫研究奠定瞭實驗基礎.
목적:구건비수체단백락안산격매Syk적진핵표체재체,전염인유선암세포,사기재세포중은정표체,이연구Syk대인유선암세포MHC-Ⅰ류분자표체적영향.방법:이RTPCR법종인유선암세포주MDA-MB-468확증출syk편마서렬기인편단,장기극륭도진핵표체재체pcDNA3.1D/V5-His-TOPO중.대중조질립진행매절、PCR급측서감정후,이지질체개도법전염Syk결실적인유선암세포MDA-MB-231,경G418사선,구건syk기인은정표체적세포주,통과Western blot、RT-PCR화류식세포술검측전염유선암세포Syk、MHC-Ⅰ급ICAM-Ⅰ적표체.결과:구건료hsyk진핵표체재체pcDNA3.1D/V5-His-TOPO/hsyk,병재인유선암세포MDA-MB-231중획득은정표체.표체Syk적MDA-MB-231세포동시가이고표체MHC-Ⅰ화ICAM-Ⅰ.결론:성공지구건료syk진핵표체재체병재진핵세포중표체,위진일보적종류면역연구전정료실험기출.
