CAJ | 학술논문

目的:人神经生长因子包括β-神经生长因子、神经生长因子这两种活性形式,拟分别构建这两种活性形式的基因重组真核表达载体,为进一步的转基因实验作好前期准备.方法:实验于2001～2004年在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成.①对象:健康志愿者5人,均对本实验知情同意.流产胎儿由青岛大学医学院妇产科提供,产妇均签署知情同意书,实验经医院医学伦理委员会批准.②实验方法:根据人β-神经生长因子与神经生长因子的全长基因序列设计合成特异性引物.抽取正常人外周血1.5 mL,提取基因组DNA后克隆出人β-神经生长因子基因片段.取胎儿海马部位脑组织100 mg,采用RT-PCR技术从胎儿脑组织中克隆出人神经生长因子基因片段.分别将纯化的β-神经生长因子产物与神经生长因子产物连接于真核表达载体pcDNA4上,构建重组真核表达载体.转入JM109大肠杆菌中,扩增后小剂量质粒提取,酶切鉴定及计算机自动测序.结果:β-神经生长因子和神经生长因子的PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果显示,在预期位置均有阳性条带.酶切鉴定结果及计算机自动测序均证实插入片段为目的基因片断.结论:实验分别从人外周血和胎脑海马组织中成功克隆获得β-神经生长因子与神经生长因子,并顺利构建这两种活性形式的重组真核表达载体pcDNA4-β-NGF与pcDNA4-NGF,为进一步将神经生长因子基因转入真核细胞并比较二者表达效率作好准备工作.
목적:인신경생장인자포괄β-신경생장인자、신경생장인자저량충활성형식,의분별구건저량충활성형식적기인중조진핵표체재체,위진일보적전기인실험작호전기준비.방법:실험우2001～2004년재청도대학의학원부속의원중심실험실완성.①대상:건강지원자5인,균대본실험지정동의.유산태인유청도대학의학원부산과제공,산부균첨서지정동의서,실험경의원의학윤리위원회비준.②실험방법:근거인β-신경생장인자여신경생장인자적전장기인서렬설계합성특이성인물.추취정상인외주혈1.5 mL,제취기인조DNA후극륭출인β-신경생장인자기인편단.취태인해마부위뇌조직100 mg,채용RT-PCR기술종태인뇌조직중극륭출인신경생장인자기인편단.분별장순화적β-신경생장인자산물여신경생장인자산물련접우진핵표체재체pcDNA4상,구건중조진핵표체재체.전입JM109대장간균중,확증후소제량질립제취,매절감정급계산궤자동측서.결과:β-신경생장인자화신경생장인자적PCR산물경지당응효전영결과현시,재예기위치균유양성조대.매절감정결과급계산궤자동측서균증실삽입편단위목적기인편단.결론:실험분별종인외주혈화태뇌해마조직중성공극륭획득β-신경생장인자여신경생장인자,병순리구건저량충활성형식적중조진핵표체재체pcDNA4-β-NGF여pcDNA4-NGF,위진일보장신경생장인자기인전입진핵세포병비교이자표체효솔작호준비공작.