CAJ | 학술논문

构建堆形艾美耳球虫(Eimeria acervulina)孢子化卵囊cDNA表达文库,以筛选其功能性基因.用TRI-ZOL Reagent试剂提取堆形艾美耳球虫总RNA,再用Oligo(dT)12-纤维素柱从总RNA中分离mRNA,以mRNA为模板,RT-PCR法反转录合成cDNA第一链,用LD-PCR法扩增合成双链cDNA,经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切、CHROMA SPIN-400柱分离去除小于400 bp的片段后,将cDNA与已经SfiⅠ酶切的λTriplEx2载体按一定比例连接,经体外包装,建立堆形艾美耳球虫孢子化卵囊的噬菌体表达文库.随后测定文库容量为4.6×106 pfu/mL,扩增文库的滴度为4.4×1010 pfu/mL,重组率达到98%,插入片段大小为750～1 000 bp,并从扩增文库中扩增出了堆形艾美耳球虫巨噬细胞游走抑制因子基因片段.
구건퇴형애미이구충(Eimeria acervulina)포자화란낭cDNA표체문고,이사선기공능성기인.용TRI-ZOL Reagent시제제취퇴형애미이구충총RNA,재용Oligo(dT)12-섬유소주종총RNA중분리mRNA,이mRNA위모판,RT-PCR법반전록합성cDNA제일련,용LD-PCR법확증합성쌍련cDNA,경단백매K소화、SfiⅠ매절、CHROMA SPIN-400주분리거제소우400 bp적편단후,장cDNA여이경SfiⅠ매절적λTriplEx2재체안일정비례련접,경체외포장,건립퇴형애미이구충포자화란낭적서균체표체문고.수후측정문고용량위4.6×106 pfu/mL,확증문고적적도위4.4×1010 pfu/mL,중조솔체도98%,삽입편단대소위750～1 000 bp,병종확증문고중확증출료퇴형애미이구충거서세포유주억제인자기인편단.