第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2008年
1期
19-22
,共4页
谭江琳%袁顺宗%彭旭%马兵%罗高兴%吴军
譚江琳%袁順宗%彭旭%馬兵%囉高興%吳軍
담강림%원순종%팽욱%마병%라고흥%오군
P311%原核表达%增生性瘢痕
P311%原覈錶達%增生性瘢痕
P311%원핵표체%증생성반흔
目的 原核表达人增生性瘢痕新候选相关蛋白P311,并对该重组蛋白进行纯化、鉴定.方法 通过PCR方法扩增人P311基因,利用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点将其克隆至谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-s-transferase,GST)融合蛋白表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-β-D-5-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,用SDS-PAGE、Western blotting等方法鉴定表达产物,并用谷胱甘肽-琼脂糖小珠亲和纯化表达的GST-P311蛋白.结果 重组载体pGEX-4T-P311经酶切与测序鉴定证实构建成功.导入大肠杆菌进行表达,表达产物相对分子量为34KD左右,与预期值相符.该条带经免疫印迹检测鉴定为GST抗体阳性,获得了纯化的GST-P311蛋白.结论 构建了pGEX-4T-P311原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,亲和纯化获得较高纯度的GST融合蛋白,为下一步继续研究P311的生物学功能奠定了基础.
目的 原覈錶達人增生性瘢痕新候選相關蛋白P311,併對該重組蛋白進行純化、鑒定.方法 通過PCR方法擴增人P311基因,利用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位點將其剋隆至穀胱甘肽-S-轉移酶(glutathione-s-transferase,GST)融閤蛋白錶達載體pGEX-4T-1中,轉化大腸桿菌BL21(DE3)後,經異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-β-D-5-thiogalactoside,IPTG)誘導錶達,用SDS-PAGE、Western blotting等方法鑒定錶達產物,併用穀胱甘肽-瓊脂糖小珠親和純化錶達的GST-P311蛋白.結果 重組載體pGEX-4T-P311經酶切與測序鑒定證實構建成功.導入大腸桿菌進行錶達,錶達產物相對分子量為34KD左右,與預期值相符.該條帶經免疫印跡檢測鑒定為GST抗體暘性,穫得瞭純化的GST-P311蛋白.結論 構建瞭pGEX-4T-P311原覈錶達載體,併在大腸桿菌BL21(DE3)中成功錶達,親和純化穫得較高純度的GST融閤蛋白,為下一步繼續研究P311的生物學功能奠定瞭基礎.
목적 원핵표체인증생성반흔신후선상관단백P311,병대해중조단백진행순화、감정.방법 통과PCR방법확증인P311기인,이용BamH Ⅰ화Xho Ⅰ매절위점장기극륭지곡광감태-S-전이매(glutathione-s-transferase,GST)융합단백표체재체pGEX-4T-1중,전화대장간균BL21(DE3)후,경이병기류대-β-D-반유당감(isopropyl-β-D-5-thiogalactoside,IPTG)유도표체,용SDS-PAGE、Western blotting등방법감정표체산물,병용곡광감태-경지당소주친화순화표체적GST-P311단백.결과 중조재체pGEX-4T-P311경매절여측서감정증실구건성공.도입대장간균진행표체,표체산물상대분자량위34KD좌우,여예기치상부.해조대경면역인적검측감정위GST항체양성,획득료순화적GST-P311단백.결론 구건료pGEX-4T-P311원핵표체재체,병재대장간균BL21(DE3)중성공표체,친화순화획득교고순도적GST융합단백,위하일보계속연구P311적생물학공능전정료기출.
