中山大学学报（医学科学版）
中山大學學報（醫學科學版）
중산대학학보（의학과학판）
JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2005年
z1期
157-159
,共3页
马会慧%陆才生%陈雪娟%高志良%李刚%杨绍基%姚集鲁
馬會慧%陸纔生%陳雪娟%高誌良%李剛%楊紹基%姚集魯
마회혜%륙재생%진설연%고지량%리강%양소기%요집로
细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白%腺病毒%载体%基因表达
細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4免疫毬蛋白%腺病毒%載體%基因錶達
세포독성T림파세포상관항원4면역구단백%선병독%재체%기인표체
[目的]构建表达人CTLA4Ig的非复制型重组腺病毒载体并检测其在真核细胞中的表达.[方法]分离人外周血单个核细胞,提取细胞总RNA,经RT-PCR分别扩增含抑瘤素M信号肽的CTLA4胞外段及IgG恒定区(含绞链区-CH2-CH3)基因片段.将PCR产物克隆入pCDNA3,阳性重组子以双酶切和测序鉴定.将目的基因CTLA4-Ig亚克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,与5型腺病毒骨架质粒pAdeasy-1共转染BJ5183,经细菌内同源重组构建重组腺病毒载体.采用脂质体法转染293细胞包装产生重组腺病毒,进一步感染HepG2细胞,采用RT-PCR及ELISA测定CTLA4Ig表达情况.[结果]构建了表达人CTLA4Ig基因的重组腺病毒,病毒滴度可达6×109 pfu/mL,并能在HepG2和骨髓间充质干细胞中表达CTLA4Ig.[结论]成功构建表达CTLA4Ig的重组腺病毒载体,为进一步研究肝细胞移植排异及自身免疫性疾病的免疫调节治疗提供有力的手段与工具.
[目的]構建錶達人CTLA4Ig的非複製型重組腺病毒載體併檢測其在真覈細胞中的錶達.[方法]分離人外週血單箇覈細胞,提取細胞總RNA,經RT-PCR分彆擴增含抑瘤素M信號肽的CTLA4胞外段及IgG恆定區(含絞鏈區-CH2-CH3)基因片段.將PCR產物剋隆入pCDNA3,暘性重組子以雙酶切和測序鑒定.將目的基因CTLA4-Ig亞剋隆入腺病毒穿梭質粒pAdTrack-CMV,與5型腺病毒骨架質粒pAdeasy-1共轉染BJ5183,經細菌內同源重組構建重組腺病毒載體.採用脂質體法轉染293細胞包裝產生重組腺病毒,進一步感染HepG2細胞,採用RT-PCR及ELISA測定CTLA4Ig錶達情況.[結果]構建瞭錶達人CTLA4Ig基因的重組腺病毒,病毒滴度可達6×109 pfu/mL,併能在HepG2和骨髓間充質榦細胞中錶達CTLA4Ig.[結論]成功構建錶達CTLA4Ig的重組腺病毒載體,為進一步研究肝細胞移植排異及自身免疫性疾病的免疫調節治療提供有力的手段與工具.
[목적]구건표체인CTLA4Ig적비복제형중조선병독재체병검측기재진핵세포중적표체.[방법]분리인외주혈단개핵세포,제취세포총RNA,경RT-PCR분별확증함억류소M신호태적CTLA4포외단급IgG항정구(함교련구-CH2-CH3)기인편단.장PCR산물극륭입pCDNA3,양성중조자이쌍매절화측서감정.장목적기인CTLA4-Ig아극륭입선병독천사질립pAdTrack-CMV,여5형선병독골가질립pAdeasy-1공전염BJ5183,경세균내동원중조구건중조선병독재체.채용지질체법전염293세포포장산생중조선병독,진일보감염HepG2세포,채용RT-PCR급ELISA측정CTLA4Ig표체정황.[결과]구건료표체인CTLA4Ig기인적중조선병독,병독적도가체6×109 pfu/mL,병능재HepG2화골수간충질간세포중표체CTLA4Ig.[결론]성공구건표체CTLA4Ig적중조선병독재체,위진일보연구간세포이식배이급자신면역성질병적면역조절치료제공유력적수단여공구.
