新乡医学院学报
新鄉醫學院學報
신향의학원학보
JOURNAL OF XINXIANG MEDICAL COLLEGE
2008年
1期
1-4
,共4页
李晓永%冯绮文%董艳%周亚芹%葛勤敏%张洪梅%苏青
李曉永%馮綺文%董豔%週亞芹%葛勤敏%張洪梅%囌青
리효영%풍기문%동염%주아근%갈근민%장홍매%소청
甲状腺刺激激素受体%克隆%真核表达载体
甲狀腺刺激激素受體%剋隆%真覈錶達載體
갑상선자격격소수체%극륭%진핵표체재체
目的 克隆人甲状腺刺激激素受体(Htshr)基因Cdna并构建其真核表达载体.方法 以人甲状腺组织Cdna为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增Htshr基因编码区的全部序列,克隆入Pgem-T载体中,经限制性内切酶、DNA序列分析鉴定目的基因后,定向亚克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,并进行双酶切鉴定.结果 PCR扩增的特异性片段长度为2 337 bp,以此构建的Pgem-T-Htshr克隆载体,经限制性内切酶酶切及DNA序列分析证实载体中带有Htshr基因编码区的目的片段,重组质粒pcDNA3.1-Htshr经KpnⅠ和XbaⅠ双酶切后显示5 1000 bp和2 300 bp左右的2个条带,DNA序列分析显示与GenBank中的Htshr基因Cdna序列一致,证明Htshr基因已成功克隆入真核细胞表达载体pcDNA3.1中.结论 成功构建了野生型pcDNA3.1-Htshr重组真核表达载体.
目的 剋隆人甲狀腺刺激激素受體(Htshr)基因Cdna併構建其真覈錶達載體.方法 以人甲狀腺組織Cdna為模闆,聚閤酶鏈反應(PCR)擴增Htshr基因編碼區的全部序列,剋隆入Pgem-T載體中,經限製性內切酶、DNA序列分析鑒定目的基因後,定嚮亞剋隆到真覈細胞錶達載體pcDNA3.1中,併進行雙酶切鑒定.結果 PCR擴增的特異性片段長度為2 337 bp,以此構建的Pgem-T-Htshr剋隆載體,經限製性內切酶酶切及DNA序列分析證實載體中帶有Htshr基因編碼區的目的片段,重組質粒pcDNA3.1-Htshr經KpnⅠ和XbaⅠ雙酶切後顯示5 1000 bp和2 300 bp左右的2箇條帶,DNA序列分析顯示與GenBank中的Htshr基因Cdna序列一緻,證明Htshr基因已成功剋隆入真覈細胞錶達載體pcDNA3.1中.結論 成功構建瞭野生型pcDNA3.1-Htshr重組真覈錶達載體.
목적 극륭인갑상선자격격소수체(Htshr)기인Cdna병구건기진핵표체재체.방법 이인갑상선조직Cdna위모판,취합매련반응(PCR)확증Htshr기인편마구적전부서렬,극륭입Pgem-T재체중,경한제성내절매、DNA서렬분석감정목적기인후,정향아극륭도진핵세포표체재체pcDNA3.1중,병진행쌍매절감정.결과 PCR확증적특이성편단장도위2 337 bp,이차구건적Pgem-T-Htshr극륭재체,경한제성내절매매절급DNA서렬분석증실재체중대유Htshr기인편마구적목적편단,중조질립pcDNA3.1-Htshr경KpnⅠ화XbaⅠ쌍매절후현시5 1000 bp화2 300 bp좌우적2개조대,DNA서렬분석현시여GenBank중적Htshr기인Cdna서렬일치,증명Htshr기인이성공극륭입진핵세포표체재체pcDNA3.1중.결론 성공구건료야생형pcDNA3.1-Htshr중조진핵표체재체.
