微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2007年
6期
987-991
,共5页
胰岛素%干酪乳杆菌%乳酸乳球菌%表达%非肥胖糖尿病(NOD)小鼠
胰島素%榦酪乳桿菌%乳痠乳毬菌%錶達%非肥胖糖尿病(NOD)小鼠
이도소%간락유간균%유산유구균%표체%비비반당뇨병(NOD)소서
为实现人胰岛素基因在乳酸菌中的表达及探索其用作口服疫苗治疗Ⅰ型糖尿病(T1DM)的可行性,首先将人胰岛素基因密码子替换为乳酸菌偏爱密码子,同时在A,B链序列间加入连接短肽序列,经引物退火拼接合成人胰岛素基因.克隆至乳酸菌表达载体中后,利用电击转化法实现了带信号肽SPUsp45的人胰岛素基因在乳酸乳球菌(Lactococcus lactis) MG1363和干酪乳杆菌(Lactobacillus casei) ATCC27092中的表达.Western blot检测显示重组胰岛素位于细胞壁上,当菌体生长到OD600为0.4时达到最大表达量.用含有表达重组人胰岛素的Lactobacillus caseiATCC27092/pSW501菌体饲喂非肥胖糖尿病(NOD)小鼠,发现可刺激小鼠产生特异性抗体,同时使与免疫耐受相关的细胞因子IL-4水平明显升高(38.583±2.083pg/mL,P＜0.05),提示其对NOD小鼠产生免疫耐受有一定的作用,为研制乳酸菌口服疫苗防治T1DM的可行性进行了有益的探索.
為實現人胰島素基因在乳痠菌中的錶達及探索其用作口服疫苗治療Ⅰ型糖尿病(T1DM)的可行性,首先將人胰島素基因密碼子替換為乳痠菌偏愛密碼子,同時在A,B鏈序列間加入連接短肽序列,經引物退火拼接閤成人胰島素基因.剋隆至乳痠菌錶達載體中後,利用電擊轉化法實現瞭帶信號肽SPUsp45的人胰島素基因在乳痠乳毬菌(Lactococcus lactis) MG1363和榦酪乳桿菌(Lactobacillus casei) ATCC27092中的錶達.Western blot檢測顯示重組胰島素位于細胞壁上,噹菌體生長到OD600為0.4時達到最大錶達量.用含有錶達重組人胰島素的Lactobacillus caseiATCC27092/pSW501菌體飼餵非肥胖糖尿病(NOD)小鼠,髮現可刺激小鼠產生特異性抗體,同時使與免疫耐受相關的細胞因子IL-4水平明顯升高(38.583±2.083pg/mL,P＜0.05),提示其對NOD小鼠產生免疫耐受有一定的作用,為研製乳痠菌口服疫苗防治T1DM的可行性進行瞭有益的探索.
위실현인이도소기인재유산균중적표체급탐색기용작구복역묘치료Ⅰ형당뇨병(T1DM)적가행성,수선장인이도소기인밀마자체환위유산균편애밀마자,동시재A,B련서렬간가입련접단태서렬,경인물퇴화병접합성인이도소기인.극륭지유산균표체재체중후,이용전격전화법실현료대신호태SPUsp45적인이도소기인재유산유구균(Lactococcus lactis) MG1363화간락유간균(Lactobacillus casei) ATCC27092중적표체.Western blot검측현시중조이도소위우세포벽상,당균체생장도OD600위0.4시체도최대표체량.용함유표체중조인이도소적Lactobacillus caseiATCC27092/pSW501균체사위비비반당뇨병(NOD)소서,발현가자격소서산생특이성항체,동시사여면역내수상관적세포인자IL-4수평명현승고(38.583±2.083pg/mL,P＜0.05),제시기대NOD소서산생면역내수유일정적작용,위연제유산균구복역묘방치T1DM적가행성진행료유익적탐색.
