检验检疫科学
檢驗檢疫科學
검험검역과학
INSPECTION AND QUARANTINE SCIENCE
2007年
5期
27-31
,共5页
徐淑菲%孔繁德%高隆英%刘荭%陈信忠%龚艳青
徐淑菲%孔繁德%高隆英%劉葒%陳信忠%龔豔青
서숙비%공번덕%고륭영%류홍%진신충%공염청
传染性鲑鱼贫血病毒%阳性质控品%SYBR-Green Ⅰ实时荧光PCR%检测
傳染性鮭魚貧血病毒%暘性質控品%SYBR-Green Ⅰ實時熒光PCR%檢測
전염성해어빈혈병독%양성질공품%SYBR-Green Ⅰ실시형광PCR%검측
[目的]利用SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR检测传染性鲑鱼贫血病.[方法]根据传染性鲑鱼贫血病毒(ISAV)Y10404的序列合成部分基因片段,将其插入到T载体中,构建阳性质控品;并设计合成一对特异性引物.利用阳性质控品建立SYBR-Green Ⅰ实时荧光PCR方法,对反应体系进行优化,进行特异性和敏感性分析,并制作标准曲线.[结果]最佳引物终浓度为0.51μmol/L.所建立的SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR方法能够特异地检出ISAV;最低检出浓度为9.5× 10-8 μg/μL,其灵敏度比传统PCR高1000倍;能够从阳性样品中检出ISAV,Tm值为82.5℃.建立了标准曲线,其r2＞0.99.
[目的]利用SYBR-GreenⅠ實時熒光PCR檢測傳染性鮭魚貧血病.[方法]根據傳染性鮭魚貧血病毒(ISAV)Y10404的序列閤成部分基因片段,將其插入到T載體中,構建暘性質控品;併設計閤成一對特異性引物.利用暘性質控品建立SYBR-Green Ⅰ實時熒光PCR方法,對反應體繫進行優化,進行特異性和敏感性分析,併製作標準麯線.[結果]最佳引物終濃度為0.51μmol/L.所建立的SYBR-GreenⅠ實時熒光PCR方法能夠特異地檢齣ISAV;最低檢齣濃度為9.5× 10-8 μg/μL,其靈敏度比傳統PCR高1000倍;能夠從暘性樣品中檢齣ISAV,Tm值為82.5℃.建立瞭標準麯線,其r2＞0.99.
[목적]이용SYBR-GreenⅠ실시형광PCR검측전염성해어빈혈병.[방법]근거전염성해어빈혈병독(ISAV)Y10404적서렬합성부분기인편단,장기삽입도T재체중,구건양성질공품;병설계합성일대특이성인물.이용양성질공품건립SYBR-Green Ⅰ실시형광PCR방법,대반응체계진행우화,진행특이성화민감성분석,병제작표준곡선.[결과]최가인물종농도위0.51μmol/L.소건립적SYBR-GreenⅠ실시형광PCR방법능구특이지검출ISAV;최저검출농도위9.5× 10-8 μg/μL,기령민도비전통PCR고1000배;능구종양성양품중검출ISAV,Tm치위82.5℃.건립료표준곡선,기r2＞0.99.
