中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2007年
33期
6538-6542
,共5页
大鼠%三七总皂甙%肝卵圆细胞%缝隙连接蛋白%缝隙连接细胞间通讯%调控
大鼠%三七總皂甙%肝卵圓細胞%縫隙連接蛋白%縫隙連接細胞間通訊%調控
대서%삼칠총조대%간란원세포%봉극련접단백%봉극련접세포간통신%조공
目的:观察三七总皂甙对大鼠肝卵圆细胞增殖模型肝脏缝隙连接蛋白32、43表达、缝隙连接细胞间通讯功能和肝卵圆细胞增殖的影响,探讨三七总皂甙调节肝卵圆细胞增殖的可能机制.方法:实验于2004-07/2006-02在江西省分子医学重点实验室完成.①实验材料:健康雄性清洁级Wistar大鼠,体质量150 g左右,随机分成对照组(n=6)、模型组(n=38)、三七总皂甙组(n=37).三七总皂甙注射剂(昆明制药集团股份有限公司惠赠).②实验方法:模型组大鼠按20 mg/(kg·d)剂量灌喂2-乙酰氨基芴,连续4 d,第5天不灌喂,行2/3肝切除,术后次日按20 mg/(kg·d)剂量继续灌喂5 d;三七总皂甙组大鼠按模型组建模时,即第1次2-乙酰氨基芴灌胃前1 h予以三七总皂甙25 mg/(kg·d)腹腔内注射,并持续实验结束.模型组、三七总皂甙组在术后4 h,4 d,8 d,12 d,16 d随机取6只大鼠检测.对照组大鼠未作特殊处理,作正常对照.③实验评估:采用组织病理技术观察肝组织的形态学变化;免疫组织化学和细胞形态学方法计数肝卵圆细胞;切开标记/染料示踪技术确定缝隙连接细胞间通讯;免疫组织化学及RT-PCR技术检测缝隙连接蛋白32蛋白及m RNA表达;免疫组织化学、Western blot及RT-PCR技术分析CX43蛋白及m RNA水平.结果:肝功能衰竭导致模型组大鼠死亡8只,三七总皂甙组死亡7只,共66只进入结果分析.①大鼠肝卵圆细胞的活化、增殖情况:对照组,模型组和三七总皂甙组4 h未见肝卵圆细胞增殖.模型组4 d汇管区有肝卵圆细胞增殖反应,8 d肝卵圆细胞增殖达峰值,12 d肝卵圆细胞从汇管区向肝实质内浸润,16 d肝卵圆细胞增殖较12 d减少.与模型组比较,三七总皂甙组4,8,16 d减少(P＜0.05),12 d增殖肝卵圆细胞增多(P＜0.05).②大鼠肝脏缝隙连接细胞间通讯的变化:各时点模型组、三七总皂甙组大鼠肝脏缝隙连接细胞间通讯均低于对照组(P＜0.01),与模型组比较,三七总皂甙组各时点缝隙连接细胞间通讯升高(P＜0.01).③大鼠肝脏CX32、CX43蛋白及CX32、CX43 mRNA表达:模型组、三七总皂甙组各时点CX32蛋白表达低于对照组(P＜0.05),与模型组比较,三七总皂甙组4 d表达上调(P＞0.05),余时点均明显升高(P＜0.05).模型组CX32mRNA水平4 h～16 d各时点均低于对照组,与模型组比较,三七总皂甙组4 h上调(P＞0.05),4～16 d明显升高(P＜0.05);模型组、三七总皂甙组CX43蛋白表达上调,模型组4 h～16 d各时点CX43蛋白均高于对照组.与模型组比较,三七总皂甙组在4 h下凋(P＞0.05),4 d、8 d时点表达下降(P＜0.01),12,16 d时点升高(P＜0.05,P＜0.01).模型组CX43mRNA4 h～16 d各时点均高于对照组.与模型组比较,三七总皂甙组CX43 mRNA水平与蛋白趋势一致,呈现表达峰值低、持续时间长的特点.结论:三七总皂甙可使大鼠2-乙酰氨基芴喂食+肝切除术模型肝脏的肝卵圆细胞增殖峰低、滞后、持续时间长,其机制与调节大鼠2-乙酰氨基芴喂食+肝切除术模型肝脏的缝隙连接蛋白时空表达模式改变肝脏缝隙连接细胞间通讯功能相关.
目的:觀察三七總皂甙對大鼠肝卵圓細胞增殖模型肝髒縫隙連接蛋白32、43錶達、縫隙連接細胞間通訊功能和肝卵圓細胞增殖的影響,探討三七總皂甙調節肝卵圓細胞增殖的可能機製.方法:實驗于2004-07/2006-02在江西省分子醫學重點實驗室完成.①實驗材料:健康雄性清潔級Wistar大鼠,體質量150 g左右,隨機分成對照組(n=6)、模型組(n=38)、三七總皂甙組(n=37).三七總皂甙註射劑(昆明製藥集糰股份有限公司惠贈).②實驗方法:模型組大鼠按20 mg/(kg·d)劑量灌餵2-乙酰氨基芴,連續4 d,第5天不灌餵,行2/3肝切除,術後次日按20 mg/(kg·d)劑量繼續灌餵5 d;三七總皂甙組大鼠按模型組建模時,即第1次2-乙酰氨基芴灌胃前1 h予以三七總皂甙25 mg/(kg·d)腹腔內註射,併持續實驗結束.模型組、三七總皂甙組在術後4 h,4 d,8 d,12 d,16 d隨機取6隻大鼠檢測.對照組大鼠未作特殊處理,作正常對照.③實驗評估:採用組織病理技術觀察肝組織的形態學變化;免疫組織化學和細胞形態學方法計數肝卵圓細胞;切開標記/染料示蹤技術確定縫隙連接細胞間通訊;免疫組織化學及RT-PCR技術檢測縫隙連接蛋白32蛋白及m RNA錶達;免疫組織化學、Western blot及RT-PCR技術分析CX43蛋白及m RNA水平.結果:肝功能衰竭導緻模型組大鼠死亡8隻,三七總皂甙組死亡7隻,共66隻進入結果分析.①大鼠肝卵圓細胞的活化、增殖情況:對照組,模型組和三七總皂甙組4 h未見肝卵圓細胞增殖.模型組4 d彙管區有肝卵圓細胞增殖反應,8 d肝卵圓細胞增殖達峰值,12 d肝卵圓細胞從彙管區嚮肝實質內浸潤,16 d肝卵圓細胞增殖較12 d減少.與模型組比較,三七總皂甙組4,8,16 d減少(P＜0.05),12 d增殖肝卵圓細胞增多(P＜0.05).②大鼠肝髒縫隙連接細胞間通訊的變化:各時點模型組、三七總皂甙組大鼠肝髒縫隙連接細胞間通訊均低于對照組(P＜0.01),與模型組比較,三七總皂甙組各時點縫隙連接細胞間通訊升高(P＜0.01).③大鼠肝髒CX32、CX43蛋白及CX32、CX43 mRNA錶達:模型組、三七總皂甙組各時點CX32蛋白錶達低于對照組(P＜0.05),與模型組比較,三七總皂甙組4 d錶達上調(P＞0.05),餘時點均明顯升高(P＜0.05).模型組CX32mRNA水平4 h～16 d各時點均低于對照組,與模型組比較,三七總皂甙組4 h上調(P＞0.05),4～16 d明顯升高(P＜0.05);模型組、三七總皂甙組CX43蛋白錶達上調,模型組4 h～16 d各時點CX43蛋白均高于對照組.與模型組比較,三七總皂甙組在4 h下凋(P＞0.05),4 d、8 d時點錶達下降(P＜0.01),12,16 d時點升高(P＜0.05,P＜0.01).模型組CX43mRNA4 h～16 d各時點均高于對照組.與模型組比較,三七總皂甙組CX43 mRNA水平與蛋白趨勢一緻,呈現錶達峰值低、持續時間長的特點.結論:三七總皂甙可使大鼠2-乙酰氨基芴餵食+肝切除術模型肝髒的肝卵圓細胞增殖峰低、滯後、持續時間長,其機製與調節大鼠2-乙酰氨基芴餵食+肝切除術模型肝髒的縫隙連接蛋白時空錶達模式改變肝髒縫隙連接細胞間通訊功能相關.
목적:관찰삼칠총조대대대서간란원세포증식모형간장봉극련접단백32、43표체、봉극련접세포간통신공능화간란원세포증식적영향,탐토삼칠총조대조절간란원세포증식적가능궤제.방법:실험우2004-07/2006-02재강서성분자의학중점실험실완성.①실험재료:건강웅성청길급Wistar대서,체질량150 g좌우,수궤분성대조조(n=6)、모형조(n=38)、삼칠총조대조(n=37).삼칠총조대주사제(곤명제약집단고빈유한공사혜증).②실험방법:모형조대서안20 mg/(kg·d)제량관위2-을선안기물,련속4 d,제5천불관위,행2/3간절제,술후차일안20 mg/(kg·d)제량계속관위5 d;삼칠총조대조대서안모형조건모시,즉제1차2-을선안기물관위전1 h여이삼칠총조대25 mg/(kg·d)복강내주사,병지속실험결속.모형조、삼칠총조대조재술후4 h,4 d,8 d,12 d,16 d수궤취6지대서검측.대조조대서미작특수처리,작정상대조.③실험평고:채용조직병리기술관찰간조직적형태학변화;면역조직화학화세포형태학방법계수간란원세포;절개표기/염료시종기술학정봉극련접세포간통신;면역조직화학급RT-PCR기술검측봉극련접단백32단백급m RNA표체;면역조직화학、Western blot급RT-PCR기술분석CX43단백급m RNA수평.결과:간공능쇠갈도치모형조대서사망8지,삼칠총조대조사망7지,공66지진입결과분석.①대서간란원세포적활화、증식정황:대조조,모형조화삼칠총조대조4 h미견간란원세포증식.모형조4 d회관구유간란원세포증식반응,8 d간란원세포증식체봉치,12 d간란원세포종회관구향간실질내침윤,16 d간란원세포증식교12 d감소.여모형조비교,삼칠총조대조4,8,16 d감소(P＜0.05),12 d증식간란원세포증다(P＜0.05).②대서간장봉극련접세포간통신적변화:각시점모형조、삼칠총조대조대서간장봉극련접세포간통신균저우대조조(P＜0.01),여모형조비교,삼칠총조대조각시점봉극련접세포간통신승고(P＜0.01).③대서간장CX32、CX43단백급CX32、CX43 mRNA표체:모형조、삼칠총조대조각시점CX32단백표체저우대조조(P＜0.05),여모형조비교,삼칠총조대조4 d표체상조(P＞0.05),여시점균명현승고(P＜0.05).모형조CX32mRNA수평4 h～16 d각시점균저우대조조,여모형조비교,삼칠총조대조4 h상조(P＞0.05),4～16 d명현승고(P＜0.05);모형조、삼칠총조대조CX43단백표체상조,모형조4 h～16 d각시점CX43단백균고우대조조.여모형조비교,삼칠총조대조재4 h하조(P＞0.05),4 d、8 d시점표체하강(P＜0.01),12,16 d시점승고(P＜0.05,P＜0.01).모형조CX43mRNA4 h～16 d각시점균고우대조조.여모형조비교,삼칠총조대조CX43 mRNA수평여단백추세일치,정현표체봉치저、지속시간장적특점.결론:삼칠총조대가사대서2-을선안기물위식+간절제술모형간장적간란원세포증식봉저、체후、지속시간장,기궤제여조절대서2-을선안기물위식+간절제술모형간장적봉극련접단백시공표체모식개변간장봉극련접세포간통신공능상관.
