CAJ | 학술논문

为了解人TAGE的解整合素域对肿瘤细胞粘附和侵袭的影响以及其独立于其他结构域发挥作用的能力,从单核细胞系THP1中提取RNA,RT-PCR扩增出TAGE全长基因,构建了pMD18T-TAGE载体.对pMD18T-TAGE质粒进行PCR,分别扩增T300(300bp,编码解整合素域)、T800(800bp,编码酶催化域)及T1300(1300bp,编码胞外域)三个片段,将其分别亚克隆至表达载体pET28a(+).把质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),表达产物均以不溶性包涵体形式存在.经过溶解包涵体、BBST NTA树脂枉亲和层析并透析复性,获得高纯度的三种活性蛋白.MTT法、细胞粘附实验、Transwell小室侵袭实验分别显示TAGE解整合素域、胞外域蛋白均能明显抑制A549细胞的增殖,且以剂量依赖性的方式抑制A549细胞与纤维粘连蛋白的粘附,并能抑制Transwell小室中A549细胞对Matrigel模拟的天然基底膜的侵袭,而酶催化域蛋白则无相应的抑制能力.表明重组TAGE解整合素域蛋白可独立抑制肿瘤细胞的增殖、粘附和侵袭,为深入研究该区域的作用及TAGE在肿瘤发病中的机制提供了新的认识.
위료해인TAGE적해정합소역대종류세포점부화침습적영향이급기독립우기타결구역발휘작용적능력,종단핵세포계THP1중제취RNA,RT-PCR확증출TAGE전장기인,구건료pMD18T-TAGE재체.대pMD18T-TAGE질립진행PCR,분별확증T300(300bp,편마해정합소역)、T800(800bp,편마매최화역)급T1300(1300bp,편마포외역)삼개편단,장기분별아극륭지표체재체pET28a(+).파질립전화대장간균BL21(DE3),표체산물균이불용성포함체형식존재.경과용해포함체、BBST NTA수지왕친화층석병투석복성,획득고순도적삼충활성단백.MTT법、세포점부실험、Transwell소실침습실험분별현시TAGE해정합소역、포외역단백균능명현억제A549세포적증식,차이제량의뢰성적방식억제A549세포여섬유점련단백적점부,병능억제Transwell소실중A549세포대Matrigel모의적천연기저막적침습,이매최화역단백칙무상응적억제능력.표명중조TAGE해정합소역단백가독립억제종류세포적증식、점부화침습,위심입연구해구역적작용급TAGE재종류발병중적궤제제공료신적인식.