蛇毒金属蛋白酶Alfimeprase在大肠杆菌中的表达、纯化及活性检测
사독금속단백매Alfimeprase재대장간균중적표체、순화급활성검측
Expression, Purification and Activity Assay of Alfimeprase, a Snake Venom Metalloproteinase in Escherichia coli
  • 万方数据
    生物技术通讯 생물기술통신
    LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
    2007年 3期 409-411 ,共3页

    黄金路%李招发%戴红梅%李玉玲%汤国营%周长林%方宏清%陈惠鹏

    황금로%리초발%대홍매%리옥령%탕국영%주장림%방굉청%진혜붕

    蛇毒金属蛋白酶%Alfimeprase%包涵体%纤维蛋白%纤维蛋白原 蛇毒金屬蛋白酶%Alfimeprase%包涵體%纖維蛋白%纖維蛋白原
    사독금속단백매%Alfimeprase%포함체%섬유단백%섬유단백원
    目的:应用大肠杆菌表达系统表达纤溶性蛇毒金属蛋白酶Alfimeprase.方法:运用PCR技术扩增人工合成的目的基因,引入Nde Ⅰ、EcoRⅠ双酶切位点;目的基因经Nde Ⅰ、EcoRⅠ双酶切后,克隆到pET22b载体上,然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行胞内表达,对获得的包涵体进行体外透析复性;应用纤维蛋白原水解法、纤维蛋白平板法和纤维蛋白层叠法检测复性后蛋白的降纤活性.结果:目的蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中获得高表达,复性后的蛋白具有降解纤维蛋白(原)的活性.结论:Alfimeprase包涵体可以通过复性获得活性产物.
    목적:응용대장간균표체계통표체섬용성사독금속단백매Alfimeprase.방법:운용PCR기술확증인공합성적목적기인,인입Nde Ⅰ、EcoRⅠ쌍매절위점;목적기인경Nde Ⅰ、EcoRⅠ쌍매절후,극륭도pET22b재체상,연후장중조질립전화대장간균BL21(DE3)진행포내표체,대획득적포함체진행체외투석복성;응용섬유단백원수해법、섬유단백평판법화섬유단백층첩법검측복성후단백적강섬활성.결과:목적단백이포함체형식재대장간균중획득고표체,복성후적단백구유강해섬유단백(원)적활성.결론:Alfimeprase포함체가이통과복성획득활성산물.
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