中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2007年
1期
74-79
,共6页
王春雨%周颖%张智松%阎春和%吴荃%石建党%张琚
王春雨%週穎%張智鬆%閻春和%吳荃%石建黨%張琚
왕춘우%주영%장지송%염춘화%오전%석건당%장거
前列腺增生%平滑肌细胞%成纤维细胞%SM22启动子
前列腺增生%平滑肌細胞%成纖維細胞%SM22啟動子
전렬선증생%평활기세포%성섬유세포%SM22계동자
平滑肌细胞的数量、表型以及在间质细胞中所占的比例在前列腺间质增生的发生和发展中占有重要的地位.获得纯的平滑肌细胞和成纤维细胞,研究它们基因表达的差异,有助于进一步揭示前列腺增生的分子病因学.构建不同长度的SM22启动子,测定荧光素酶活性.采用了基于启动子特异性激活红绿色荧光蛋白表达结合流式细胞分选的策略,体外分离纯的平滑肌细胞和成纤维细胞.启动子活性实验结果表明,1396 bp的人SM22启动子具有平滑肌细胞特异性和较高的相对活性.构建了红绿荧光蛋白的表达载体pDual-color,在此载体中,RFP的表达受1 396 bp的SM22启动子调控,GFP的组成型表达受CMV启动子控制.用流式细胞仪分选GFP+/RFP+和GFP+/RFP-细胞,提取总RNA,进行实时定量RT-PCR.结果显示,在分选获得的GFP+/RFP+细胞比GFP+/RFP-细胞的SM22和SMMHC表达水平高10倍以上.提示,基于启动子特异性可以在体外分离纯的平滑肌细胞和成纤维细胞.
平滑肌細胞的數量、錶型以及在間質細胞中所佔的比例在前列腺間質增生的髮生和髮展中佔有重要的地位.穫得純的平滑肌細胞和成纖維細胞,研究它們基因錶達的差異,有助于進一步揭示前列腺增生的分子病因學.構建不同長度的SM22啟動子,測定熒光素酶活性.採用瞭基于啟動子特異性激活紅綠色熒光蛋白錶達結閤流式細胞分選的策略,體外分離純的平滑肌細胞和成纖維細胞.啟動子活性實驗結果錶明,1396 bp的人SM22啟動子具有平滑肌細胞特異性和較高的相對活性.構建瞭紅綠熒光蛋白的錶達載體pDual-color,在此載體中,RFP的錶達受1 396 bp的SM22啟動子調控,GFP的組成型錶達受CMV啟動子控製.用流式細胞儀分選GFP+/RFP+和GFP+/RFP-細胞,提取總RNA,進行實時定量RT-PCR.結果顯示,在分選穫得的GFP+/RFP+細胞比GFP+/RFP-細胞的SM22和SMMHC錶達水平高10倍以上.提示,基于啟動子特異性可以在體外分離純的平滑肌細胞和成纖維細胞.
평활기세포적수량、표형이급재간질세포중소점적비례재전렬선간질증생적발생화발전중점유중요적지위.획득순적평활기세포화성섬유세포,연구타문기인표체적차이,유조우진일보게시전렬선증생적분자병인학.구건불동장도적SM22계동자,측정형광소매활성.채용료기우계동자특이성격활홍록색형광단백표체결합류식세포분선적책략,체외분리순적평활기세포화성섬유세포.계동자활성실험결과표명,1396 bp적인SM22계동자구유평활기세포특이성화교고적상대활성.구건료홍록형광단백적표체재체pDual-color,재차재체중,RFP적표체수1 396 bp적SM22계동자조공,GFP적조성형표체수CMV계동자공제.용류식세포의분선GFP+/RFP+화GFP+/RFP-세포,제취총RNA,진행실시정량RT-PCR.결과현시,재분선획득적GFP+/RFP+세포비GFP+/RFP-세포적SM22화SMMHC표체수평고10배이상.제시,기우계동자특이성가이재체외분리순적평활기세포화성섬유세포.
