第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2006年
6期
499-502
,共4页
魏静%李晋涛%支轶%唐艳%张小萍%王靖雪%吴玉章
魏靜%李晉濤%支軼%唐豔%張小萍%王靖雪%吳玉章
위정%리진도%지질%당염%장소평%왕정설%오옥장
轮状病毒%VP6%HLA-A*0201%CTL%表位
輪狀病毒%VP6%HLA-A*0201%CTL%錶位
륜상병독%VP6%HLA-A*0201%CTL%표위
目的预测并初步鉴定轮状病毒Wa株结构蛋白VP6 HLA-A*0201限制性CTL表位,为轮状病毒免疫保护机制研究及疫苗的研制奠定基础.方法应用表位亲和力预测软件SYFPEITHI及蛋白酶切位点预测软件PAProc和Fragpredict相结合预测VP6 HLA-A*0201限制性CTL表位;用分子模拟对候选肽作进一步筛选;标准Fmoc方案合成候选肽,RP-HPLC纯化、分析,质谱进行鉴定;最后用T2细胞株测定候选肽与HLA-A*0201分子的亲和力及稳定性.结果结合SYFPEITHI、蛋白酶切位点预测结果及分子模建结果,选择分值最高同时在C-末端含有蛋白酶切位点的4条肽作为候选表位肽;标准Fmoc方案合成的各肽纯度均大于95%,质谱检测结果表明,各肽的相对分子质量与理论值基本一致;在候选的4条表位肽中,TLLANVTAV(340-348)和VLADANETL(333-341)与HLA-A*0201呈高亲和力结合,荧光系数(flurorescene index,FI)分别为2.66和2.64,同时肽-HLA-A*0201复合物半数解离时间(dissociation complex50,DC50)均大于8 h.结论TLLANVTAV(340-348)和VLADANETL(333-341)为潜在的HLA-A*0201限制性CTL表位.
目的預測併初步鑒定輪狀病毒Wa株結構蛋白VP6 HLA-A*0201限製性CTL錶位,為輪狀病毒免疫保護機製研究及疫苗的研製奠定基礎.方法應用錶位親和力預測軟件SYFPEITHI及蛋白酶切位點預測軟件PAProc和Fragpredict相結閤預測VP6 HLA-A*0201限製性CTL錶位;用分子模擬對候選肽作進一步篩選;標準Fmoc方案閤成候選肽,RP-HPLC純化、分析,質譜進行鑒定;最後用T2細胞株測定候選肽與HLA-A*0201分子的親和力及穩定性.結果結閤SYFPEITHI、蛋白酶切位點預測結果及分子模建結果,選擇分值最高同時在C-末耑含有蛋白酶切位點的4條肽作為候選錶位肽;標準Fmoc方案閤成的各肽純度均大于95%,質譜檢測結果錶明,各肽的相對分子質量與理論值基本一緻;在候選的4條錶位肽中,TLLANVTAV(340-348)和VLADANETL(333-341)與HLA-A*0201呈高親和力結閤,熒光繫數(flurorescene index,FI)分彆為2.66和2.64,同時肽-HLA-A*0201複閤物半數解離時間(dissociation complex50,DC50)均大于8 h.結論TLLANVTAV(340-348)和VLADANETL(333-341)為潛在的HLA-A*0201限製性CTL錶位.
목적예측병초보감정륜상병독Wa주결구단백VP6 HLA-A*0201한제성CTL표위,위륜상병독면역보호궤제연구급역묘적연제전정기출.방법응용표위친화력예측연건SYFPEITHI급단백매절위점예측연건PAProc화Fragpredict상결합예측VP6 HLA-A*0201한제성CTL표위;용분자모의대후선태작진일보사선;표준Fmoc방안합성후선태,RP-HPLC순화、분석,질보진행감정;최후용T2세포주측정후선태여HLA-A*0201분자적친화력급은정성.결과결합SYFPEITHI、단백매절위점예측결과급분자모건결과,선택분치최고동시재C-말단함유단백매절위점적4조태작위후선표위태;표준Fmoc방안합성적각태순도균대우95%,질보검측결과표명,각태적상대분자질량여이론치기본일치;재후선적4조표위태중,TLLANVTAV(340-348)화VLADANETL(333-341)여HLA-A*0201정고친화력결합,형광계수(flurorescene index,FI)분별위2.66화2.64,동시태-HLA-A*0201복합물반수해리시간(dissociation complex50,DC50)균대우8 h.결론TLLANVTAV(340-348)화VLADANETL(333-341)위잠재적HLA-A*0201한제성CTL표위.
