CAJ | 학술논문

背景与目的:研究表明STAT3蛋白在多种肿瘤组织或细胞中高表达,STAT3蛋白可能参与了肿瘤的形成和发生.本文拟研究STAT3蛋白在鼠黑色素瘤细胞B16、人肝癌细胞SMMC-7721、人肝癌细胞HepG-2、人肺癌细胞A549、人宫颈癌HeLa细胞株中表达和活化情况,研究反义STAT3寡核苷酸对B16细胞的增殖抑制和促凋亡作用,为进一步反义药物设计及应用于辐射领域作前期研究.方法:利用Western blot检测所选几种肿瘤细胞的STAT3蛋白表达和磷酸化情况、反义干涉前后B16细胞中STAT3蛋白表达和磷酸化活化的变化情况,MTT法检测细胞增殖变化,利用Hoechst33258染色对细胞凋亡作形态学上的观察,用Annexin V/PI复染结合流式细胞仪检测细胞早期凋亡.结果:所研究的几种肿瘤细胞中均可检测到STAT3蛋白的高表达和磷酸化;反义STAT3转染后,B16细胞中STAT3蛋白的表达量及磷酸化水平均有下降;转染后48 h,在0到200 nmol/L范围内,反义核酸浓度越高,对B16细胞的增殖抑制效应越强,但是并不能够完全抑制肿瘤细胞的增殖(P＜0.01).寡核苷酸浓度超过250 nmol/L时,正义对照也表现出一定的增殖抑制作用(P＜0.05);转染后不同时间内检测,结果表明转染后24 h反义核酸即开始表现出一定的增殖抑制效应,48 h起表现出明显的抑制效应;反义转染后,检测各组细胞早期凋亡率:对照组早期凋亡率为5.52%,反义400、800、2 000 nmol/L组早期凋亡率分别为8.22%、9.99%,16.97%,正义对照400、800、2 000 nmol/L组早期凋亡率分别为5.87%、5.36%、13.31%.统计分析表明反义寡核苷酸与B16细胞作用后能够促进细胞的早期凋亡(P＜0.01),正义低浓度转染组(400、800 nmol/L组)与对照组无明显差别(P＞0.05),而对照组与正义2 000 nmol/L组相比,细胞的早期凋亡率也有统计学差异(P＜0.01).结论:B16、SMMC-7721、HepG-2、A549、HeLa等恶性肿瘤细胞株中STAT3蛋白高表达并且可检测到磷酸化水平的增高;反义转染后B16细胞中STAT3蛋白的表达和磷酸化水平降低,细胞增殖受到明显抑制,细胞的凋亡增加,表明STAT3可能成为肿瘤治疗新的分子靶位. 揹景與目的:研究錶明STAT3蛋白在多種腫瘤組織或細胞中高錶達,STAT3蛋白可能參與瞭腫瘤的形成和髮生.本文擬研究STAT3蛋白在鼠黑色素瘤細胞B16、人肝癌細胞SMMC-7721、人肝癌細胞HepG-2、人肺癌細胞A549、人宮頸癌HeLa細胞株中錶達和活化情況,研究反義STAT3寡覈苷痠對B16細胞的增殖抑製和促凋亡作用,為進一步反義藥物設計及應用于輻射領域作前期研究.方法:利用Western blot檢測所選幾種腫瘤細胞的STAT3蛋白錶達和燐痠化情況、反義榦涉前後B16細胞中STAT3蛋白錶達和燐痠化活化的變化情況,MTT法檢測細胞增殖變化,利用Hoechst33258染色對細胞凋亡作形態學上的觀察,用Annexin V/PI複染結閤流式細胞儀檢測細胞早期凋亡.結果:所研究的幾種腫瘤細胞中均可檢測到STAT3蛋白的高錶達和燐痠化;反義STAT3轉染後,B16細胞中STAT3蛋白的錶達量及燐痠化水平均有下降;轉染後48 h,在0到200 nmol/L範圍內,反義覈痠濃度越高,對B16細胞的增殖抑製效應越彊,但是併不能夠完全抑製腫瘤細胞的增殖(P＜0.01).寡覈苷痠濃度超過250 nmol/L時,正義對照也錶現齣一定的增殖抑製作用(P＜0.05);轉染後不同時間內檢測,結果錶明轉染後24 h反義覈痠即開始錶現齣一定的增殖抑製效應,48 h起錶現齣明顯的抑製效應;反義轉染後,檢測各組細胞早期凋亡率:對照組早期凋亡率為5.52%,反義400、800、2 000 nmol/L組早期凋亡率分彆為8.22%、9.99%,16.97%,正義對照400、800、2 000 nmol/L組早期凋亡率分彆為5.87%、5.36%、13.31%.統計分析錶明反義寡覈苷痠與B16細胞作用後能夠促進細胞的早期凋亡(P＜0.01),正義低濃度轉染組(400、800 nmol/L組)與對照組無明顯差彆(P＞0.05),而對照組與正義2 000 nmol/L組相比,細胞的早期凋亡率也有統計學差異(P＜0.01).結論:B16、SMMC-7721、HepG-2、A549、HeLa等噁性腫瘤細胞株中STAT3蛋白高錶達併且可檢測到燐痠化水平的增高;反義轉染後B16細胞中STAT3蛋白的錶達和燐痠化水平降低,細胞增殖受到明顯抑製,細胞的凋亡增加,錶明STAT3可能成為腫瘤治療新的分子靶位.
배경여목적:연구표명STAT3단백재다충종류조직혹세포중고표체,STAT3단백가능삼여료종류적형성화발생.본문의연구STAT3단백재서흑색소류세포B16、인간암세포SMMC-7721、인간암세포HepG-2、인폐암세포A549、인궁경암HeLa세포주중표체화활화정황,연구반의STAT3과핵감산대B16세포적증식억제화촉조망작용,위진일보반의약물설계급응용우복사영역작전기연구.방법:이용Western blot검측소선궤충종류세포적STAT3단백표체화린산화정황、반의간섭전후B16세포중STAT3단백표체화린산화활화적변화정황,MTT법검측세포증식변화,이용Hoechst33258염색대세포조망작형태학상적관찰,용Annexin V/PI복염결합류식세포의검측세포조기조망.결과:소연구적궤충종류세포중균가검측도STAT3단백적고표체화린산화;반의STAT3전염후,B16세포중STAT3단백적표체량급린산화수평균유하강;전염후48 h,재0도200 nmol/L범위내,반의핵산농도월고,대B16세포적증식억제효응월강,단시병불능구완전억제종류세포적증식(P＜0.01).과핵감산농도초과250 nmol/L시,정의대조야표현출일정적증식억제작용(P＜0.05);전염후불동시간내검측,결과표명전염후24 h반의핵산즉개시표현출일정적증식억제효응,48 h기표현출명현적억제효응;반의전염후,검측각조세포조기조망솔:대조조조기조망솔위5.52%,반의400、800、2 000 nmol/L조조기조망솔분별위8.22%、9.99%,16.97%,정의대조400、800、2 000 nmol/L조조기조망솔분별위5.87%、5.36%、13.31%.통계분석표명반의과핵감산여B16세포작용후능구촉진세포적조기조망(P＜0.01),정의저농도전염조(400、800 nmol/L조)여대조조무명현차별(P＞0.05),이대조조여정의2 000 nmol/L조상비,세포적조기조망솔야유통계학차이(P＜0.01).결론:B16、SMMC-7721、HepG-2、A549、HeLa등악성종류세포주중STAT3단백고표체병차가검측도린산화수평적증고;반의전염후B16세포중STAT3단백적표체화린산화수평강저,세포증식수도명현억제,세포적조망증가,표명STAT3가능성위종류치료신적분자파위.