CAJ | 학술논문

白细胞介素10(IL-10)是一种作用广泛的抗炎细胞因子,主要功能是限制和最终终止炎症反应.用RACE(rapid amplification of cDNA ends)-PCR方法扩增出鲢白细胞介素10(IL-10)的cDNA,其全长为1248nt,包含5'非编码区156nt,3'非编码区552nt,开放阅读框540nt.鲢IL-10的开放阅读框编码179个氨基酸,其中包含构成两对二硫键的4个保守半胱氨酸.RT-PCR结果显示鲢IL-10mRNA主要在脾脏、鳃、头肾和肌肉中表达.将鲢IL-10完整开放阅读框克隆到原核融合表达载体pET-32a-c(+)上,转入大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)内进行表达,经SDS-PAGE电泳后显示重组融合蛋白在分子量约39 ku处有明显表达带,与预期分子量大小一致,且主要以不可溶的包涵体形式存在.变性条件下利用His·Bind树脂成功纯化了融合蛋白,将其免疫家兔,获得兔多克隆抗鲢IL-10抗体,Western blot检测到兔多克隆抗鲢IL-10抗体可有效地与重组蛋白结合.这些结果为进一步研究IL-10的功能奠定了基础.
백세포개소10(IL-10)시일충작용엄범적항염세포인자,주요공능시한제화최종종지염증반응.용RACE(rapid amplification of cDNA ends)-PCR방법확증출련백세포개소10(IL-10)적cDNA,기전장위1248nt,포함5'비편마구156nt,3'비편마구552nt,개방열독광540nt.련IL-10적개방열독광편마179개안기산,기중포함구성량대이류건적4개보수반광안산.RT-PCR결과현시련IL-10mRNA주요재비장、새、두신화기육중표체.장련IL-10완정개방열독광극륭도원핵융합표체재체pET-32a-c(+)상,전입대장간균Rosetta-gami(DE3)내진행표체,경SDS-PAGE전영후현시중조융합단백재분자량약39 ku처유명현표체대,여예기분자량대소일치,차주요이불가용적포함체형식존재.변성조건하이용His·Bind수지성공순화료융합단백,장기면역가토,획득토다극륭항련IL-10항체,Western blot검측도토다극륭항련IL-10항체가유효지여중조단백결합.저사결과위진일보연구IL-10적공능전정료기출.