第二军医大学学报
第二軍醫大學學報
제이군의대학학보
ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2003年
6期
650-653
,共4页
游兴姬%杨生生%蔡在龙%张志珍%焦炳华%毛积芳
遊興姬%楊生生%蔡在龍%張誌珍%焦炳華%毛積芳
유흥희%양생생%채재룡%장지진%초병화%모적방
核转录因子κB%RNA适体%重组腺病毒载体
覈轉錄因子κB%RNA適體%重組腺病毒載體
핵전록인자κB%RNA괄체%중조선병독재체
目的:构建核转录因子κB(NF-κB)RNA适体(aptamer)重组腺病毒载体pAdeasy-aptamer,制备重组腺病毒Ad-aptamer并测定其活性.方法:采用亚磷酸二酯法合成aptamer cDNA的6个寡核苷酸片段并拼接完整,克隆至pGEM-7Z载体中,经酶切鉴定和测序后把aptamer cDNA定向插入穿梭质粒pShuttle-CMV的多克隆位点上,再将重组质粒pShuttle-CMV-aptamer与腺病毒载体pAdeasy在大肠杆菌BJ5183中同源重组产生重组腺病毒载体pAdeasy-aptamer.用脂质体转染pAdeasy-aptamer至HEK293细胞,产生有感染能力的重组腺病毒Ad-aptamer,RT-PCR检测重组腺病毒在感染细胞中的表达,并测定其对体外抑制炎症细胞系释放炎症介质IL-1β和IL-6的影响.结果:感染重组腺病毒的细胞具有aptamer cDNA的表达,重组腺病毒能抑制感染细胞炎症介质的释放,具有预期的生物学活性.结论:产生具有生物学活性的重组腺病毒Ad-aptamer,为下一步基因治疗因NF-κB 过度激活引起的急慢性炎症反应奠定基础.
目的:構建覈轉錄因子κB(NF-κB)RNA適體(aptamer)重組腺病毒載體pAdeasy-aptamer,製備重組腺病毒Ad-aptamer併測定其活性.方法:採用亞燐痠二酯法閤成aptamer cDNA的6箇寡覈苷痠片段併拼接完整,剋隆至pGEM-7Z載體中,經酶切鑒定和測序後把aptamer cDNA定嚮插入穿梭質粒pShuttle-CMV的多剋隆位點上,再將重組質粒pShuttle-CMV-aptamer與腺病毒載體pAdeasy在大腸桿菌BJ5183中同源重組產生重組腺病毒載體pAdeasy-aptamer.用脂質體轉染pAdeasy-aptamer至HEK293細胞,產生有感染能力的重組腺病毒Ad-aptamer,RT-PCR檢測重組腺病毒在感染細胞中的錶達,併測定其對體外抑製炎癥細胞繫釋放炎癥介質IL-1β和IL-6的影響.結果:感染重組腺病毒的細胞具有aptamer cDNA的錶達,重組腺病毒能抑製感染細胞炎癥介質的釋放,具有預期的生物學活性.結論:產生具有生物學活性的重組腺病毒Ad-aptamer,為下一步基因治療因NF-κB 過度激活引起的急慢性炎癥反應奠定基礎.
목적:구건핵전록인자κB(NF-κB)RNA괄체(aptamer)중조선병독재체pAdeasy-aptamer,제비중조선병독Ad-aptamer병측정기활성.방법:채용아린산이지법합성aptamer cDNA적6개과핵감산편단병병접완정,극륭지pGEM-7Z재체중,경매절감정화측서후파aptamer cDNA정향삽입천사질립pShuttle-CMV적다극륭위점상,재장중조질립pShuttle-CMV-aptamer여선병독재체pAdeasy재대장간균BJ5183중동원중조산생중조선병독재체pAdeasy-aptamer.용지질체전염pAdeasy-aptamer지HEK293세포,산생유감염능력적중조선병독Ad-aptamer,RT-PCR검측중조선병독재감염세포중적표체,병측정기대체외억제염증세포계석방염증개질IL-1β화IL-6적영향.결과:감염중조선병독적세포구유aptamer cDNA적표체,중조선병독능억제감염세포염증개질적석방,구유예기적생물학활성.결론:산생구유생물학활성적중조선병독Ad-aptamer,위하일보기인치료인NF-κB 과도격활인기적급만성염증반응전정기출.
