中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2001年
5期
590-594
,共5页
邓兵兵%方宏清%赵洪亮%刘志敏%薛冲
鄧兵兵%方宏清%趙洪亮%劉誌敏%薛遲
산병병%방굉청%조홍량%류지민%설충
肝细胞生长因子%巴斯德毕赤酵母%分泌表达
肝細胞生長因子%巴斯德畢赤酵母%分泌錶達
간세포생장인자%파사덕필적효모%분비표체
研究了hdHGF基因在毕赤酵母中的表达.以人胎盘mRNA为模板,经逆转录、重叠PCR获得hdHGF全长和成熟基因片段.将该基因片段克隆到pPIC9载体上,将重组表达质粒转化巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,筛选mut+表型,经甲醇诱导可实现rhdHGF的分泌表达.经摇瓶培养筛选出4株表达水平较高的酵母工程菌株,SDS-PAGE分析和Western印迹试验表明,产物分子量约为80 kD,5L发酵罐高密度培养已使生物量达135 g/L(干重),发酵液上清总蛋白量为8.0 g/L,电泳结果表明rhdHGF表达水平为总蛋白的12.3%.
研究瞭hdHGF基因在畢赤酵母中的錶達.以人胎盤mRNA為模闆,經逆轉錄、重疊PCR穫得hdHGF全長和成熟基因片段.將該基因片段剋隆到pPIC9載體上,將重組錶達質粒轉化巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)GS115,篩選mut+錶型,經甲醇誘導可實現rhdHGF的分泌錶達.經搖瓶培養篩選齣4株錶達水平較高的酵母工程菌株,SDS-PAGE分析和Western印跡試驗錶明,產物分子量約為80 kD,5L髮酵罐高密度培養已使生物量達135 g/L(榦重),髮酵液上清總蛋白量為8.0 g/L,電泳結果錶明rhdHGF錶達水平為總蛋白的12.3%.
연구료hdHGF기인재필적효모중적표체.이인태반mRNA위모판,경역전록、중첩PCR획득hdHGF전장화성숙기인편단.장해기인편단극륭도pPIC9재체상,장중조표체질립전화파사덕필적효모(Pichia pastoris)GS115,사선mut+표형,경갑순유도가실현rhdHGF적분비표체.경요병배양사선출4주표체수평교고적효모공정균주,SDS-PAGE분석화Western인적시험표명,산물분자량약위80 kD,5L발효관고밀도배양이사생물량체135 g/L(간중),발효액상청총단백량위8.0 g/L,전영결과표명rhdHGF표체수평위총단백적12.3%.
