生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2001年
5期
570-574
,共5页
徐京宁%俞俊棠%杨运桂%龚毅%杨胜利
徐京寧%俞俊棠%楊運桂%龔毅%楊勝利
서경저%유준당%양운계%공의%양성리
青霉素G酰化酶%成熟过程%宿主/载体系统
青黴素G酰化酶%成熟過程%宿主/載體繫統
청매소G선화매%성숙과정%숙주/재체계통
为了研究大肠杆菌中青霉素G酰化酶(Penicillin G acylase,PAC)成熟的限制性步骤,分别构建了PAC表达质粒pKKpacSP,pETpacSP,并将它们在大肠杆菌宿主中表达.通过酶活性的测定及Western blotting分析,分别在PAC自身表达系统,Tac,T7及氧调控表达系统中,研究PAC前体蛋白加工成α亚基、β亚基的效率及亚基折叠组装形成活性酶的能力.结果表明:PAC成熟过程中的限制性步骤因宿主/载体系统而异;PAC本身表达系统中,前体肽加工成α亚基、β亚基的效率为57.2%,亚基组装能力为0.72;Tac启动子表达调控系统中α亚基的折叠和稳定成为限制性步骤;T7及氧调控表达系统中,PAC前体肽加工成α亚基、β亚基的效率达90%左右,亚基组装成活性酶的能力分别为1.82,2;低氧调控系统表达PAC时,成熟的效率最高,PAC表达的单位重量活性提高10倍.
為瞭研究大腸桿菌中青黴素G酰化酶(Penicillin G acylase,PAC)成熟的限製性步驟,分彆構建瞭PAC錶達質粒pKKpacSP,pETpacSP,併將它們在大腸桿菌宿主中錶達.通過酶活性的測定及Western blotting分析,分彆在PAC自身錶達繫統,Tac,T7及氧調控錶達繫統中,研究PAC前體蛋白加工成α亞基、β亞基的效率及亞基摺疊組裝形成活性酶的能力.結果錶明:PAC成熟過程中的限製性步驟因宿主/載體繫統而異;PAC本身錶達繫統中,前體肽加工成α亞基、β亞基的效率為57.2%,亞基組裝能力為0.72;Tac啟動子錶達調控繫統中α亞基的摺疊和穩定成為限製性步驟;T7及氧調控錶達繫統中,PAC前體肽加工成α亞基、β亞基的效率達90%左右,亞基組裝成活性酶的能力分彆為1.82,2;低氧調控繫統錶達PAC時,成熟的效率最高,PAC錶達的單位重量活性提高10倍.
위료연구대장간균중청매소G선화매(Penicillin G acylase,PAC)성숙적한제성보취,분별구건료PAC표체질립pKKpacSP,pETpacSP,병장타문재대장간균숙주중표체.통과매활성적측정급Western blotting분석,분별재PAC자신표체계통,Tac,T7급양조공표체계통중,연구PAC전체단백가공성α아기、β아기적효솔급아기절첩조장형성활성매적능력.결과표명:PAC성숙과정중적한제성보취인숙주/재체계통이이;PAC본신표체계통중,전체태가공성α아기、β아기적효솔위57.2%,아기조장능력위0.72;Tac계동자표체조공계통중α아기적절첩화은정성위한제성보취;T7급양조공표체계통중,PAC전체태가공성α아기、β아기적효솔체90%좌우,아기조장성활성매적능력분별위1.82,2;저양조공계통표체PAC시,성숙적효솔최고,PAC표체적단위중량활성제고10배.
