卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv/mGM-CSF融合蛋白的构建、表达及活性测定
란소암항독특형단련항체6B11ScFv/mGM-CSF융합단백적구건、표체급활성측정
THE CONSTRUCTION, EXPRESSION AND ACTIVITY EXAMINATIONS OF 6B11ScFv/MURINE GM-CSF FUSION PROTEIN
  • 万方数据
    解剖学报 해부학보
    ACTA ANATOMICA SINICA
    2000年 3期 226-230 ,共5页

    刘蓓%崔恒%冯捷%叶雪%李艺%曹善津%葛华%付天云%姚煜%钱和年

    류배%최항%풍첩%협설%리예%조선진%갈화%부천운%요욱%전화년

    卵巢癌%重组融合蛋白%抗体%抗独特型%粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子%包涵体 卵巢癌%重組融閤蛋白%抗體%抗獨特型%粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子%包涵體
    란소암%중조융합단백%항체%항독특형%립세포-거서세포집락자격인자%포함체
    目的构建卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv和鼠GM-CSF融合蛋白(6B11mGM),以观察其在动物体内诱导的特异性免疫反应,为卵巢癌抗独特型疫苗应用于临床提供依据. 方法用DNA重组技术,将mGM-CSF连于单链抗体6B11ScFv羧基末端,构建重组质粒pET30-6B11mGM,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导,以包涵体形式获高效表达,超声破碎细菌细胞获得包涵体,用8mol.L-1尿素溶解包涵体后直接稀释复性,SDS-PAGE分析蛋白纯度,ELISA分析技术和细胞增殖实验测定融合蛋白的抗体和细胞因子活性. 结果复性蛋白纯度达90%以上.采用氧化型谷胱甘肽(GSSG)浓度为1mmol.L-1,还原型谷胱甘肽(GSH)浓度为5mmol.L-1,10℃复性48h,复性率达36%.表达的融合蛋白分别能与COC166-9单抗和大鼠抗小鼠GM-CSF单抗特异结合,并能刺激mGM-CSF依赖株NFS-60细胞增殖. 结论以包涵体表达的融合蛋白6B11mGM保留了两种蛋白的活性,为研究融合蛋白在体内的免疫功能提供了基础.
    목적구건란소암항독특형단련항체6B11ScFv화서GM-CSF융합단백(6B11mGM),이관찰기재동물체내유도적특이성면역반응,위란소암항독특형역묘응용우림상제공의거. 방법용DNA중조기술,장mGM-CSF련우단련항체6B11ScFv최기말단,구건중조질립pET30-6B11mGM,전화대장간균BL21(DE3),IPTG유도,이포함체형식획고효표체,초성파쇄세균세포획득포함체,용8mol.L-1뇨소용해포함체후직접희석복성,SDS-PAGE분석단백순도,ELISA분석기술화세포증식실험측정융합단백적항체화세포인자활성. 결과복성단백순도체90%이상.채용양화형곡광감태(GSSG)농도위1mmol.L-1,환원형곡광감태(GSH)농도위5mmol.L-1,10℃복성48h,복성솔체36%.표체적융합단백분별능여COC166-9단항화대서항소서GM-CSF단항특이결합,병능자격mGM-CSF의뢰주NFS-60세포증식. 결론이포함체표체적융합단백6B11mGM보류료량충단백적활성,위연구융합단백재체내적면역공능제공료기출.
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