第二军医大学学报
第二軍醫大學學報
제이군의대학학보
ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
1998年
6期
530-532
,共3页
陈坚%刘小萍%曹韫旭%陆德如
陳堅%劉小萍%曹韞旭%陸德如
진견%류소평%조운욱%륙덕여
红细胞生成素%基因重组%真核表达
紅細胞生成素%基因重組%真覈錶達
홍세포생성소%기인중조%진핵표체
目的:使重组人促红细胞生成素(rhEPO)在CHO细胞中获得高效表达.方法: 利用基因重组构建了两个人促红细胞生成素cDNA重组表达质粒pED-EPO 和 pEF-EPO,分别用 DEAE-dextran 法转染COS7细胞,作瞬时高表达,选pEF-EPO用磷酸钙共沉淀法转染 CHO-dhfr-细胞,加入氨甲喋呤(MTX)扩增、选择,作稳定性高表达. 结果: pED-EPO 和 pEF-EPO转染COS7细胞后72 h表达量分别为17.8和21.0 ng/ml,pEF-EPO 转染 CHO-dhfr-细胞,随着MTX浓度的增加,CHO-dhfr+的克隆数减少,而混合克隆的EPO表达量逐渐升高.筛选了一株稳定性高表达rhEPO的细胞株,其3 d表达量为16 μg/ml.结论:rhEPO在CHO细胞中获得了高表达.
目的:使重組人促紅細胞生成素(rhEPO)在CHO細胞中穫得高效錶達.方法: 利用基因重組構建瞭兩箇人促紅細胞生成素cDNA重組錶達質粒pED-EPO 和 pEF-EPO,分彆用 DEAE-dextran 法轉染COS7細胞,作瞬時高錶達,選pEF-EPO用燐痠鈣共沉澱法轉染 CHO-dhfr-細胞,加入氨甲喋呤(MTX)擴增、選擇,作穩定性高錶達. 結果: pED-EPO 和 pEF-EPO轉染COS7細胞後72 h錶達量分彆為17.8和21.0 ng/ml,pEF-EPO 轉染 CHO-dhfr-細胞,隨著MTX濃度的增加,CHO-dhfr+的剋隆數減少,而混閤剋隆的EPO錶達量逐漸升高.篩選瞭一株穩定性高錶達rhEPO的細胞株,其3 d錶達量為16 μg/ml.結論:rhEPO在CHO細胞中穫得瞭高錶達.
목적:사중조인촉홍세포생성소(rhEPO)재CHO세포중획득고효표체.방법: 이용기인중조구건료량개인촉홍세포생성소cDNA중조표체질립pED-EPO 화 pEF-EPO,분별용 DEAE-dextran 법전염COS7세포,작순시고표체,선pEF-EPO용린산개공침정법전염 CHO-dhfr-세포,가입안갑첩령(MTX)확증、선택,작은정성고표체. 결과: pED-EPO 화 pEF-EPO전염COS7세포후72 h표체량분별위17.8화21.0 ng/ml,pEF-EPO 전염 CHO-dhfr-세포,수착MTX농도적증가,CHO-dhfr+적극륭수감소,이혼합극륭적EPO표체량축점승고.사선료일주은정성고표체rhEPO적세포주,기3 d표체량위16 μg/ml.결론:rhEPO재CHO세포중획득료고표체.
