西北大学学报(自然科学版)
西北大學學報(自然科學版)
서북대학학보(자연과학판)
JOURNAL OF NORTHWEST UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2002年
3期
298-302
,共5页
范昌发%孙春昀%孙毅%王景雪%贾敬芬%何军贤%郭骁才
範昌髮%孫春昀%孫毅%王景雪%賈敬芬%何軍賢%郭驍纔
범창발%손춘윤%손의%왕경설%가경분%하군현%곽효재
细胞质雄性不育%高粱%RAPD%技术优化
細胞質雄性不育%高粱%RAPD%技術優化
세포질웅성불육%고량%RAPD%기술우화
以高粱细胞质雄性不育系和保持系A1Tx623A/B, A2V4A/B 为材料,考察了Mg2+,Taq酶,dNTP,引物,模板等的用量、循环参数及不同的PCR仪对随机扩增多态性DNA(RAPD)反应的影响.结果发现:在25 μL体系中,MgCl2 2.0 mmol/L,Taq酶 0.75 U(1U=1 μmol/min),dNTP 0.15 mmol/L,引物16.5 ng,模板30 ng,明胶0.001%,KCl 50 mmol/L,Tris 10 mmol/L(pH8.3)为最佳反应混合物组合.对Peltier Thermal Cycler 200而言,94℃预变性5 min,94℃变性1 min,35℃退火1 min,72℃延伸2 min,最后72℃保温5 min,共计40个循环为最佳扩增条件;对Perkin Elmer Cetus DNA Thermal Cycler-480而言,采用94℃预变性3 min后,前3个循环,94℃变性1 min,35℃退火1 min,72℃延伸2 min,后37个循环,94℃变性30 s,36℃退火45 s,72℃延伸1 min,最后72℃保温5 min的循环程序可获得理想扩增.并阐述了优化RAPD实验体系的设计原则.
以高粱細胞質雄性不育繫和保持繫A1Tx623A/B, A2V4A/B 為材料,攷察瞭Mg2+,Taq酶,dNTP,引物,模闆等的用量、循環參數及不同的PCR儀對隨機擴增多態性DNA(RAPD)反應的影響.結果髮現:在25 μL體繫中,MgCl2 2.0 mmol/L,Taq酶 0.75 U(1U=1 μmol/min),dNTP 0.15 mmol/L,引物16.5 ng,模闆30 ng,明膠0.001%,KCl 50 mmol/L,Tris 10 mmol/L(pH8.3)為最佳反應混閤物組閤.對Peltier Thermal Cycler 200而言,94℃預變性5 min,94℃變性1 min,35℃退火1 min,72℃延伸2 min,最後72℃保溫5 min,共計40箇循環為最佳擴增條件;對Perkin Elmer Cetus DNA Thermal Cycler-480而言,採用94℃預變性3 min後,前3箇循環,94℃變性1 min,35℃退火1 min,72℃延伸2 min,後37箇循環,94℃變性30 s,36℃退火45 s,72℃延伸1 min,最後72℃保溫5 min的循環程序可穫得理想擴增.併闡述瞭優化RAPD實驗體繫的設計原則.
이고량세포질웅성불육계화보지계A1Tx623A/B, A2V4A/B 위재료,고찰료Mg2+,Taq매,dNTP,인물,모판등적용량、순배삼수급불동적PCR의대수궤확증다태성DNA(RAPD)반응적영향.결과발현:재25 μL체계중,MgCl2 2.0 mmol/L,Taq매 0.75 U(1U=1 μmol/min),dNTP 0.15 mmol/L,인물16.5 ng,모판30 ng,명효0.001%,KCl 50 mmol/L,Tris 10 mmol/L(pH8.3)위최가반응혼합물조합.대Peltier Thermal Cycler 200이언,94℃예변성5 min,94℃변성1 min,35℃퇴화1 min,72℃연신2 min,최후72℃보온5 min,공계40개순배위최가확증조건;대Perkin Elmer Cetus DNA Thermal Cycler-480이언,채용94℃예변성3 min후,전3개순배,94℃변성1 min,35℃퇴화1 min,72℃연신2 min,후37개순배,94℃변성30 s,36℃퇴화45 s,72℃연신1 min,최후72℃보온5 min적순배정서가획득이상확증.병천술료우화RAPD실험체계적설계원칙.
