药物生物技术
藥物生物技術
약물생물기술
PHARMACEUTICAL BIOTECHNOLOGY
2002年
1期
16-20
,共5页
查艳萍%秦永文%荆清%穆瑞斌
查豔萍%秦永文%荊清%穆瑞斌
사염평%진영문%형청%목서빈
基因重组%表达及纯化%大肠杆菌%GPⅡb/Ⅲa拮抗剂%GST-KGDX融合蛋白%抗血小板作用
基因重組%錶達及純化%大腸桿菌%GPⅡb/Ⅲa拮抗劑%GST-KGDX融閤蛋白%抗血小闆作用
기인중조%표체급순화%대장간균%GPⅡb/Ⅲa길항제%GST-KGDX융합단백%항혈소판작용
设计合成了两条编码KGDX(赖-甘-天冬-X)的寡核苷酸链,长度为36个碱基对,两端分别为BamHI酶和XcoI酶切位点.将该基因插入原核高效表达载体PGEX-4T-1的tac启动子下游,获得重组质粒PGEX-4T-1KGDX,转化大肠杆菌DH5a,37℃诱导使重组子表达.GST-KGDX融合蛋白具有可溶性,产量为35mg/L培养基,表达量占菌体总蛋白48.02%.破碎菌体上清经谷胱甘肽-琼脂糖悬珠亲和层析法获得纯度为95%的重组蛋白.125I7E3竞争拮抗实验结果表明,GST无GPⅡb/Ⅲa结合作用,GST-KGD融合蛋白能代替7E3竞争性地与GPⅡb/Ⅲa受体特异性结合,从而抑制血小板聚集.其IC50值为40μmol/L.
設計閤成瞭兩條編碼KGDX(賴-甘-天鼕-X)的寡覈苷痠鏈,長度為36箇堿基對,兩耑分彆為BamHI酶和XcoI酶切位點.將該基因插入原覈高效錶達載體PGEX-4T-1的tac啟動子下遊,穫得重組質粒PGEX-4T-1KGDX,轉化大腸桿菌DH5a,37℃誘導使重組子錶達.GST-KGDX融閤蛋白具有可溶性,產量為35mg/L培養基,錶達量佔菌體總蛋白48.02%.破碎菌體上清經穀胱甘肽-瓊脂糖懸珠親和層析法穫得純度為95%的重組蛋白.125I7E3競爭拮抗實驗結果錶明,GST無GPⅡb/Ⅲa結閤作用,GST-KGD融閤蛋白能代替7E3競爭性地與GPⅡb/Ⅲa受體特異性結閤,從而抑製血小闆聚集.其IC50值為40μmol/L.
설계합성료량조편마KGDX(뢰-감-천동-X)적과핵감산련,장도위36개감기대,량단분별위BamHI매화XcoI매절위점.장해기인삽입원핵고효표체재체PGEX-4T-1적tac계동자하유,획득중조질립PGEX-4T-1KGDX,전화대장간균DH5a,37℃유도사중조자표체.GST-KGDX융합단백구유가용성,산량위35mg/L배양기,표체량점균체총단백48.02%.파쇄균체상청경곡광감태-경지당현주친화층석법획득순도위95%적중조단백.125I7E3경쟁길항실험결과표명,GST무GPⅡb/Ⅲa결합작용,GST-KGD융합단백능대체7E3경쟁성지여GPⅡb/Ⅲa수체특이성결합,종이억제혈소판취집.기IC50치위40μmol/L.
