CAJ | 학술논문

背景:幽门螺杆菌(H.pylori)是全球人群中感染范围最广的致病菌,现已被公认为慢性胃炎和消化性溃疡的重要致病因子,并与胃腺癌和胃淋巴瘤的形成密切相关.而H.pylori疫苗可能成为控制这一全球范围感染的有效措施,其研制和开发已成为目前研究的热点.目的:探索研制H pylori疫苗的新途径,对H pylori 27 kDa外膜蛋白(OMP27)进行基因克隆和特性鉴定.方法:培养和收集H pylori菌株NCTC11637,采用酚:氯仿抽提和纯化基因组DNA.分别设计引物P1和P2,并以该基因组DNA为模板,以聚合酶链反应(PCR)方法扩增OMP27基因片段.构建pQE30-OMP27重组表达载体时,pQE30质粒载体和纯化的PCR产物均用限制性内切酶KpnⅠ和HindⅢ双酶切,再用T4 DNA连接酶将双酶切后的目的基因片段OMP27重组于pQE30的相应酶切位点之间,连接产物转化大肠杆菌XL1-Blue.挑选转化克隆、提取质粒,并进行KpnⅠ和HindⅢ双酶切和PCR方法鉴定,1%琼脂糖凝胶电泳观察酶切和PCR扩增结果,经测序分析确认后,筛选出插入目的基因的阳性克隆,命名为pQE30-OMP27.挑取单个含重组质粒pQE30-OMP27的工程菌(XL1-Blue)阳性克隆,进行培养和IPTG诱导表达后,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和Western blot进行蛋白表达和抗原性鉴定.结果:该目的基因的PCR产物全长723 bp,编码241个氨基酸残基组成的多肽(约27 kDa).SDS-PAGE和Western blot检测表明,电泳图谱上显示出1条相对分子量约27 kDa的新生蛋白带,占细菌总蛋白的5%,并能与H pylori感染小鼠血清发生特异性反应.表明重组H pylori OMP27具有良好的抗原性.结论:H pyloriOMP27有望成为新的H pylori疫苗候选分子,并可作为抗原用于H.pylori感染患者血清膜蛋白抗体的检测.
배경:유문라간균(H.pylori)시전구인군중감염범위최엄적치병균,현이피공인위만성위염화소화성궤양적중요치병인자,병여위선암화위림파류적형성밀절상관.이H.pylori역묘가능성위공제저일전구범위감염적유효조시,기연제화개발이성위목전연구적열점.목적:탐색연제H pylori역묘적신도경,대H pylori 27 kDa외막단백(OMP27)진행기인극륭화특성감정.방법:배양화수집H pylori균주NCTC11637,채용분:록방추제화순화기인조DNA.분별설계인물P1화P2,병이해기인조DNA위모판,이취합매련반응(PCR)방법확증OMP27기인편단.구건pQE30-OMP27중조표체재체시,pQE30질립재체화순화적PCR산물균용한제성내절매KpnⅠ화HindⅢ쌍매절,재용T4 DNA련접매장쌍매절후적목적기인편단OMP27중조우pQE30적상응매절위점지간,련접산물전화대장간균XL1-Blue.도선전화극륭、제취질립,병진행KpnⅠ화HindⅢ쌍매절화PCR방법감정,1%경지당응효전영관찰매절화PCR확증결과,경측서분석학인후,사선출삽입목적기인적양성극륭,명명위pQE30-OMP27.도취단개함중조질립pQE30-OMP27적공정균(XL1-Blue)양성극륭,진행배양화IPTG유도표체후,경SDS-취병희선알응효전영(PAGE)화Western blot진행단백표체화항원성감정.결과:해목적기인적PCR산물전장723 bp,편마241개안기산잔기조성적다태(약27 kDa).SDS-PAGE화Western blot검측표명,전영도보상현시출1조상대분자량약27 kDa적신생단백대,점세균총단백적5%,병능여H pylori감염소서혈청발생특이성반응.표명중조H pylori OMP27구유량호적항원성.결론:H pyloriOMP27유망성위신적H pylori역묘후선분자,병가작위항원용우H.pylori감염환자혈청막단백항체적검측.