遗传学报
遺傳學報
유전학보
ACTA GENETICA SINICA
2002年
7期
581-588
,共8页
孟国良%滕路%薛友纺%尚克刚
孟國良%滕路%薛友紡%尚剋剛
맹국량%등로%설우방%상극강
BALB/c小鼠%胚胎干细胞%大鼠心脏细胞条件培养基(RH-CM)%内细胞团(ICM)%二倍体核型
BALB/c小鼠%胚胎榦細胞%大鼠心髒細胞條件培養基(RH-CM)%內細胞糰(ICM)%二倍體覈型
BALB/c소서%배태간세포%대서심장세포조건배양기(RH-CM)%내세포단(ICM)%이배체핵형
以小鼠胚胎成纤维细胞(ME)为饲养层,以大鼠心脏细胞条件培养基(RH-CM)为ES细胞培养基,全面、详尽地对BALB/c小鼠ES细胞的建系和培养方法进行了探讨,成功地建立了一套建立和培养BALB/c小鼠ES细胞系的新方法.这一培养条件不但有效地维持了ES细胞的未分化状态和正常二倍体核型,而且维持了其作为多能性胚胎干细胞的一系列特征;实验设计了两种离散方法和两种浓度的消化液,用来离散增殖的ICM和ICM离散后出现的ES集落.两种离散方法即"一次离散法",和"多次离散法",两种浓度的消化液即0.25髎 Trypsin-0.04髎 EDTA和0.05髎 Trypsin-0.008髎 EDTA;同时对ICM离散时机、RH-CM在BALB/c小鼠ES细胞建系和培养中作用进行了探讨.结果表明:在低浓度消化液作用下,采用"多次离散法"离散增殖4天的ICM和ES集落的方法建立BALB/c小鼠的ES细胞系是理想的;从细胞形态、集落形态、增殖生长能力、核型检测、碱性磷酸酶测定以及体内外分化能力表明,所建立的9个BALB/c小鼠ES细胞系符合小鼠胚胎干细胞的一系列特征.
以小鼠胚胎成纖維細胞(ME)為飼養層,以大鼠心髒細胞條件培養基(RH-CM)為ES細胞培養基,全麵、詳儘地對BALB/c小鼠ES細胞的建繫和培養方法進行瞭探討,成功地建立瞭一套建立和培養BALB/c小鼠ES細胞繫的新方法.這一培養條件不但有效地維持瞭ES細胞的未分化狀態和正常二倍體覈型,而且維持瞭其作為多能性胚胎榦細胞的一繫列特徵;實驗設計瞭兩種離散方法和兩種濃度的消化液,用來離散增殖的ICM和ICM離散後齣現的ES集落.兩種離散方法即"一次離散法",和"多次離散法",兩種濃度的消化液即0.25髎 Trypsin-0.04髎 EDTA和0.05髎 Trypsin-0.008髎 EDTA;同時對ICM離散時機、RH-CM在BALB/c小鼠ES細胞建繫和培養中作用進行瞭探討.結果錶明:在低濃度消化液作用下,採用"多次離散法"離散增殖4天的ICM和ES集落的方法建立BALB/c小鼠的ES細胞繫是理想的;從細胞形態、集落形態、增殖生長能力、覈型檢測、堿性燐痠酶測定以及體內外分化能力錶明,所建立的9箇BALB/c小鼠ES細胞繫符閤小鼠胚胎榦細胞的一繫列特徵.
이소서배태성섬유세포(ME)위사양층,이대서심장세포조건배양기(RH-CM)위ES세포배양기,전면、상진지대BALB/c소서ES세포적건계화배양방법진행료탐토,성공지건립료일투건립화배양BALB/c소서ES세포계적신방법.저일배양조건불단유효지유지료ES세포적미분화상태화정상이배체핵형,이차유지료기작위다능성배태간세포적일계렬특정;실험설계료량충리산방법화량충농도적소화액,용래리산증식적ICM화ICM리산후출현적ES집락.량충리산방법즉"일차리산법",화"다차리산법",량충농도적소화액즉0.25료 Trypsin-0.04료 EDTA화0.05료 Trypsin-0.008료 EDTA;동시대ICM리산시궤、RH-CM재BALB/c소서ES세포건계화배양중작용진행료탐토.결과표명:재저농도소화액작용하,채용"다차리산법"리산증식4천적ICM화ES집락적방법건립BALB/c소서적ES세포계시이상적;종세포형태、집락형태、증식생장능력、핵형검측、감성린산매측정이급체내외분화능력표명,소건립적9개BALB/c소서ES세포계부합소서배태간세포적일계렬특정.
