细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2004年
2期
230-233
,共4页
单保恩%董青%李宏芬%陈晶%董金琢%马洪
單保恩%董青%李宏芬%陳晶%董金琢%馬洪
단보은%동청%리굉분%진정%동금탁%마홍
Syk%分离纯化%凝胶层析%Sf21细胞
Syk%分離純化%凝膠層析%Sf21細胞
Syk%분리순화%응효층석%Sf21세포
目的:从转染syk基因的Sf21细胞中提取、纯化免疫相关因子Syk蛋白.方法:将syk基因转染Sf21细胞,于28℃培养48 h,收集细胞,用超声波破碎仪裂解细胞,提取裂解液中总蛋白,用Yellow-3凝胶和Toyopearl-AF-Heptin-650M凝胶层析柱分离、纯化.层析液中的Syk蛋白存在和性质,用SDS-PAGE、免疫印迹实验和等电聚焦实验鉴定.结果:从25亿个Sf21细胞裂解液中提取了含有Syk的225 mg蛋白质.经Yellow-3凝胶层析分离,得到两个亚种的Syk蛋白,相对分子质量(Mr)均为72×103.进一步用Toyopearl-AF-Heptin-650M凝胶层析纯化后,得到两个纯的Syk蛋白,SDS-PAGE、免疫印迹实验结果显示,两种Syk的Mr均为72×103,与Syk的理论相对分子质量吻合.但等电聚焦实验显示,这两种Syk蛋白成分具有不同的pI值.结论:从25亿个转染syk基因的Sf21细胞中纯化出8 mg Syk蛋白,纯度高于95%.这两种Syk的Mr虽然相同,但具有不同的pI值,是两个亚种.这些Syk可用于研究Syk的作用机制、抗Syk抗体的制备和Syk诊断试剂盒的制备等.
目的:從轉染syk基因的Sf21細胞中提取、純化免疫相關因子Syk蛋白.方法:將syk基因轉染Sf21細胞,于28℃培養48 h,收集細胞,用超聲波破碎儀裂解細胞,提取裂解液中總蛋白,用Yellow-3凝膠和Toyopearl-AF-Heptin-650M凝膠層析柱分離、純化.層析液中的Syk蛋白存在和性質,用SDS-PAGE、免疫印跡實驗和等電聚焦實驗鑒定.結果:從25億箇Sf21細胞裂解液中提取瞭含有Syk的225 mg蛋白質.經Yellow-3凝膠層析分離,得到兩箇亞種的Syk蛋白,相對分子質量(Mr)均為72×103.進一步用Toyopearl-AF-Heptin-650M凝膠層析純化後,得到兩箇純的Syk蛋白,SDS-PAGE、免疫印跡實驗結果顯示,兩種Syk的Mr均為72×103,與Syk的理論相對分子質量吻閤.但等電聚焦實驗顯示,這兩種Syk蛋白成分具有不同的pI值.結論:從25億箇轉染syk基因的Sf21細胞中純化齣8 mg Syk蛋白,純度高于95%.這兩種Syk的Mr雖然相同,但具有不同的pI值,是兩箇亞種.這些Syk可用于研究Syk的作用機製、抗Syk抗體的製備和Syk診斷試劑盒的製備等.
목적:종전염syk기인적Sf21세포중제취、순화면역상관인자Syk단백.방법:장syk기인전염Sf21세포,우28℃배양48 h,수집세포,용초성파파쇄의렬해세포,제취렬해액중총단백,용Yellow-3응효화Toyopearl-AF-Heptin-650M응효층석주분리、순화.층석액중적Syk단백존재화성질,용SDS-PAGE、면역인적실험화등전취초실험감정.결과:종25억개Sf21세포렬해액중제취료함유Syk적225 mg단백질.경Yellow-3응효층석분리,득도량개아충적Syk단백,상대분자질량(Mr)균위72×103.진일보용Toyopearl-AF-Heptin-650M응효층석순화후,득도량개순적Syk단백,SDS-PAGE、면역인적실험결과현시,량충Syk적Mr균위72×103,여Syk적이론상대분자질량문합.단등전취초실험현시,저량충Syk단백성분구유불동적pI치.결론:종25억개전염syk기인적Sf21세포중순화출8 mg Syk단백,순도고우95%.저량충Syk적Mr수연상동,단구유불동적pI치,시량개아충.저사Syk가용우연구Syk적작용궤제、항Syk항체적제비화Syk진단시제합적제비등.
