免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2008年
4期
389-391,399
,共4页
张亚丽%江文正%樊燕%钱旻
張亞麗%江文正%樊燕%錢旻
장아려%강문정%번연%전민
LIGHT%基因克隆%原核表达
LIGHT%基因剋隆%原覈錶達
LIGHT%기인극륭%원핵표체
目的 构建含有LIGHT胞外段的原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达.方法 从由小鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞中提取总RNA,经RT-PCR扩增LIGHT胞外段,克隆至原核表达载体pEF-24a(+)中,构建重组表达质粒pET24-LIGHYECD.重组质粒经酶切鉴定及序列测定后,转化E. coli BL21,IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE和Western blot进行检测.结果 RT-PCR扩增出了525 bp LIGHT胞外段的cDNA,经测序证实其序列正确.SDS-PAGE和Western blot分析证实重组质粒可表达出相对分子质量为20 000的LIGHT胞外段蛋白.结论 成功地克隆了小鼠LIGHT胞外段基因并在大肠杆菌中进行了表达,为进一步研究LIGHT的功能打下了基础.
目的 構建含有LIGHT胞外段的原覈錶達載體,併在大腸桿菌中誘導錶達.方法 從由小鼠骨髓來源的未成熟樹突狀細胞中提取總RNA,經RT-PCR擴增LIGHT胞外段,剋隆至原覈錶達載體pEF-24a(+)中,構建重組錶達質粒pET24-LIGHYECD.重組質粒經酶切鑒定及序列測定後,轉化E. coli BL21,IPTG誘導錶達,併用SDS-PAGE和Western blot進行檢測.結果 RT-PCR擴增齣瞭525 bp LIGHT胞外段的cDNA,經測序證實其序列正確.SDS-PAGE和Western blot分析證實重組質粒可錶達齣相對分子質量為20 000的LIGHT胞外段蛋白.結論 成功地剋隆瞭小鼠LIGHT胞外段基因併在大腸桿菌中進行瞭錶達,為進一步研究LIGHT的功能打下瞭基礎.
목적 구건함유LIGHT포외단적원핵표체재체,병재대장간균중유도표체.방법 종유소서골수래원적미성숙수돌상세포중제취총RNA,경RT-PCR확증LIGHT포외단,극륭지원핵표체재체pEF-24a(+)중,구건중조표체질립pET24-LIGHYECD.중조질립경매절감정급서렬측정후,전화E. coli BL21,IPTG유도표체,병용SDS-PAGE화Western blot진행검측.결과 RT-PCR확증출료525 bp LIGHT포외단적cDNA,경측서증실기서렬정학.SDS-PAGE화Western blot분석증실중조질립가표체출상대분자질량위20 000적LIGHT포외단단백.결론 성공지극륭료소서LIGHT포외단기인병재대장간균중진행료표체,위진일보연구LIGHT적공능타하료기출.
