中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2008年
8期
36-42
,共7页
黄镜贤%曹以诚%杜正平%陶嫦立%杨化强
黃鏡賢%曹以誠%杜正平%陶嫦立%楊化彊
황경현%조이성%두정평%도항립%양화강
乙型肝炎%DNA疫苗%多表位抗原%hIL-12%siRNA
乙型肝炎%DNA疫苗%多錶位抗原%hIL-12%siRNA
을형간염%DNA역묘%다표위항원%hIL-12%siRNA
目的:构建含有靶向乙肝表面抗原(HBsAg)基因的siRNA、乙肝复合多表位抗原基因和hIL-12共质粒表达的新型DNA疫苗,并在HepG2细胞中检测siRNA的效果以及各基因的表达.方法:设计并合成复合多表位HBV抗原基因,将其与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因融合克隆进真核表达载体pVAX1的多克隆位点中,同时将带CMV启动子的完整hIL-12表达单元克隆进载体的BspH I位点之间,再设计并合成乙肝siRNA表达单元,将其克隆进载体的Mlu I位点之间,得到真核三元共表达重组质粒pVAX1-siHB-HB-EGFP-hIL12.以该重组质粒瞬时转染人肝癌细胞系HepG2,通过EGFP的荧光标记观察多表位抗原的表达,以ELISA测定培养细胞上清中hIL-12的表达,以rtPCR检测siRNA对HBsAg基因的沉默效果.结果:经酶切鉴定和测序证实共表达siRNA、hIL-12的HBV 多表位DNA疫苗构建成功.转染细胞中检测到绿色荧光,证实抗原表达;转染后48 h hIL-12的检出量为1 289 pg/ml细胞上清,72 h检出量为1 712 pg/ml细胞上清;转染后HBsAg表达量明显降低,证实siRNA效果良好.结论:成功构建乙肝复合多表位抗原基因与siRNA、hIL-12共质粒表达的DNA疫苗,并能在真核细胞中有效表达抗原与hIL-12基因,而且siRNA对HBsAg显示出明显的沉默效果,为进一步研究该复合型DNA疫苗抗HBV的治疗效果打下基础.
目的:構建含有靶嚮乙肝錶麵抗原(HBsAg)基因的siRNA、乙肝複閤多錶位抗原基因和hIL-12共質粒錶達的新型DNA疫苗,併在HepG2細胞中檢測siRNA的效果以及各基因的錶達.方法:設計併閤成複閤多錶位HBV抗原基因,將其與增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)基因融閤剋隆進真覈錶達載體pVAX1的多剋隆位點中,同時將帶CMV啟動子的完整hIL-12錶達單元剋隆進載體的BspH I位點之間,再設計併閤成乙肝siRNA錶達單元,將其剋隆進載體的Mlu I位點之間,得到真覈三元共錶達重組質粒pVAX1-siHB-HB-EGFP-hIL12.以該重組質粒瞬時轉染人肝癌細胞繫HepG2,通過EGFP的熒光標記觀察多錶位抗原的錶達,以ELISA測定培養細胞上清中hIL-12的錶達,以rtPCR檢測siRNA對HBsAg基因的沉默效果.結果:經酶切鑒定和測序證實共錶達siRNA、hIL-12的HBV 多錶位DNA疫苗構建成功.轉染細胞中檢測到綠色熒光,證實抗原錶達;轉染後48 h hIL-12的檢齣量為1 289 pg/ml細胞上清,72 h檢齣量為1 712 pg/ml細胞上清;轉染後HBsAg錶達量明顯降低,證實siRNA效果良好.結論:成功構建乙肝複閤多錶位抗原基因與siRNA、hIL-12共質粒錶達的DNA疫苗,併能在真覈細胞中有效錶達抗原與hIL-12基因,而且siRNA對HBsAg顯示齣明顯的沉默效果,為進一步研究該複閤型DNA疫苗抗HBV的治療效果打下基礎.
목적:구건함유파향을간표면항원(HBsAg)기인적siRNA、을간복합다표위항원기인화hIL-12공질립표체적신형DNA역묘,병재HepG2세포중검측siRNA적효과이급각기인적표체.방법:설계병합성복합다표위HBV항원기인,장기여증강형록색형광단백(EGFP)기인융합극륭진진핵표체재체pVAX1적다극륭위점중,동시장대CMV계동자적완정hIL-12표체단원극륭진재체적BspH I위점지간,재설계병합성을간siRNA표체단원,장기극륭진재체적Mlu I위점지간,득도진핵삼원공표체중조질립pVAX1-siHB-HB-EGFP-hIL12.이해중조질립순시전염인간암세포계HepG2,통과EGFP적형광표기관찰다표위항원적표체,이ELISA측정배양세포상청중hIL-12적표체,이rtPCR검측siRNA대HBsAg기인적침묵효과.결과:경매절감정화측서증실공표체siRNA、hIL-12적HBV 다표위DNA역묘구건성공.전염세포중검측도록색형광,증실항원표체;전염후48 h hIL-12적검출량위1 289 pg/ml세포상청,72 h검출량위1 712 pg/ml세포상청;전염후HBsAg표체량명현강저,증실siRNA효과량호.결론:성공구건을간복합다표위항원기인여siRNA、hIL-12공질립표체적DNA역묘,병능재진핵세포중유효표체항원여hIL-12기인,이차siRNA대HBsAg현시출명현적침묵효과,위진일보연구해복합형DNA역묘항HBV적치료효과타하기출.
