卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv与鼠HSP70融合蛋白的构建、表达及鉴定
란소암항독특형단련항체6B11ScFv여서HSP70융합단백적구건、표체급감정
Construction,expression,and identification of ovarian anti-idiotypic single chain antibody 6B11ScFv and mouse HSP70 fusion protein
  • 万方数据
    中国医药生物技术 중국의약생물기술
    CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
    2008年 5期 336-342 ,共7页

    张果%昌晓红%石菁菁%成夜霞%李巍%叶雪%程洪艳%付天云%魏丽惠%崔恒

    장과%창효홍%석정정%성야하%리외%협설%정홍염%부천운%위려혜%최항

    抗体%抗独特型%HSP70热休克蛋白质类%重组融合蛋白质类%卵巢肿瘤 抗體%抗獨特型%HSP70熱休剋蛋白質類%重組融閤蛋白質類%卵巢腫瘤
    항체%항독특형%HSP70열휴극단백질류%중조융합단백질류%란소종류
    目的 构建卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv与小鼠热休克蛋白70(mHSP70)融合蛋白6811ScFv/mHSP70,并初步鉴定其免疫活性.方法 根据Genebank上已发表的mHSP70基因序列(NM_010478)合成引物行PCR扩增,以扩增所得mHSP70基因插入pET30a(+)-6811ScFv质粒后转化入E.coli DH5a,获得pET30a(+)-6B11ScFv/mHSP70重组质粒.将鉴定正确的pET30a(+)-6811ScFv/mHSP70重组质粒转化入E.coli BL21(DE3),获得E.coli BL21(DE3)[pET30a(+).6811ScFv/mHSP70]重组菌株.以异内基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并行SDS-PAGE分析,对表达产物进行复性和Ni2+-NTA柱亲和层析纯化后,采用蛋白质印迹法和ELISA方法 进行鉴定和免疫活性检测.结果 6811ScFv/mHSP70融合基因测序结果基本与理论序列相符.SDS-PAGE分析显示,重组菌株表达产物相对分子质量与预期相符.复性、亲和层析纯化后的蛋白复性率达20.9%,蛋白纯度达95%以上.蛋白质印迹分析证实6B11ScFv/mHSP70融合蛋白相对分子质量为104 000,ELISA检测表明其具有6811ScFv和mHSP70的免疫活性.结论 构建表达的6811ScFv/mHSP70融合蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究其体内外抗卵巢癌活性奠定了基础.
    목적 구건란소암항독특형단련항체6B11ScFv여소서열휴극단백70(mHSP70)융합단백6811ScFv/mHSP70,병초보감정기면역활성.방법 근거Genebank상이발표적mHSP70기인서렬(NM_010478)합성인물행PCR확증,이확증소득mHSP70기인삽입pET30a(+)-6811ScFv질립후전화입E.coli DH5a,획득pET30a(+)-6B11ScFv/mHSP70중조질립.장감정정학적pET30a(+)-6811ScFv/mHSP70중조질립전화입E.coli BL21(DE3),획득E.coli BL21(DE3)[pET30a(+).6811ScFv/mHSP70]중조균주.이이내기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체병행SDS-PAGE분석,대표체산물진행복성화Ni2+-NTA주친화층석순화후,채용단백질인적법화ELISA방법 진행감정화면역활성검측.결과 6811ScFv/mHSP70융합기인측서결과기본여이론서렬상부.SDS-PAGE분석현시,중조균주표체산물상대분자질량여예기상부.복성、친화층석순화후적단백복성솔체20.9%,단백순도체95%이상.단백질인적분석증실6B11ScFv/mHSP70융합단백상대분자질량위104 000,ELISA검측표명기구유6811ScFv화mHSP70적면역활성.결론 구건표체적6811ScFv/mHSP70융합단백구유량호적면역활성,위진일보연구기체내외항란소암활성전정료기출.
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