CAJ | 학술논문

背景:基因工程是目前软骨修复的主要方法,脂肪间质干细胞以其来源丰富、取材容易、免疫相容性良好、体外培养可以较长时间保持分化表型、有较强的向软骨细胞转化的能力而成为理想的种子细胞.目的:探讨胰岛素样生长因子1基因转染对兔脂肪间质干细胞增殖的影响.设计、时间及地点:细胞学基因转染体外观察,于2006-03/2007-03在中国医科大学细胞生物实验室完成.材料:成年新西兰大白兔3只,由中国医科大学实验动物中心提供.含有全长人胰岛素样生长因子1 cDNA片段的质粒pcDNA3.1-hIGF-1由吉林大学徐莘香教授惠赠.方法:取兔颈后皮下脂肪,Ⅰ型胶原酶消化法体外分离培养兔脂肪间质干细胞.取传至第2代细胞,以0.5× 106/孔密度接种于6孔板,细胞融合至90%～95%时随机分为未转染组、转染空载体pcDNA3.1组、转染质粒pcDNA3.1-hIGF-1组,采用脂质体介导基因转染法进行质粒pcDNA3.1-IGF-1转染,经G418筛选后培养4周.主要观察指标:采用RT-PCR及Western blot方法检测胰岛素样生长因子1的表达情况,MTT法及流式细胞仪检测细胞增殖情况.结果:转染pcDNA3.1-hIGF-1组的脂肪间质干细胞内有大量胰岛素样生长因子1 mRNA及蛋白表达,未转染组及转染空载体pcDNA3.1组无表达.细胞增殖曲线显示,转染质粒pcDNA3.1-hIGF-1组的脂肪间质干细胞增殖速度较其他2组细胞明显加快.流式细胞仪检测显示,转染质粒pcDNA3.1-hIGF-1组的脂肪间质干细胞较其他2组细胞的S期比例显著增加(P<0.05),G1期比例显著下降(P＜0.05).结论:质粒pcDNA3.1-IGF-1转染兔脂肪间质干细胞后,可以获得稳定表达,并能明显促进脂肪间质干细胞的增殖.
배경:기인공정시목전연골수복적주요방법,지방간질간세포이기래원봉부、취재용역、면역상용성량호、체외배양가이교장시간보지분화표형、유교강적향연골세포전화적능력이성위이상적충자세포.목적:탐토이도소양생장인자1기인전염대토지방간질간세포증식적영향.설계、시간급지점:세포학기인전염체외관찰,우2006-03/2007-03재중국의과대학세포생물실험실완성.재료:성년신서란대백토3지,유중국의과대학실험동물중심제공.함유전장인이도소양생장인자1 cDNA편단적질립pcDNA3.1-hIGF-1유길림대학서신향교수혜증.방법:취토경후피하지방,Ⅰ형효원매소화법체외분리배양토지방간질간세포.취전지제2대세포,이0.5× 106/공밀도접충우6공판,세포융합지90%～95%시수궤분위미전염조、전염공재체pcDNA3.1조、전염질립pcDNA3.1-hIGF-1조,채용지질체개도기인전염법진행질립pcDNA3.1-IGF-1전염,경G418사선후배양4주.주요관찰지표:채용RT-PCR급Western blot방법검측이도소양생장인자1적표체정황,MTT법급류식세포의검측세포증식정황.결과:전염pcDNA3.1-hIGF-1조적지방간질간세포내유대량이도소양생장인자1 mRNA급단백표체,미전염조급전염공재체pcDNA3.1조무표체.세포증식곡선현시,전염질립pcDNA3.1-hIGF-1조적지방간질간세포증식속도교기타2조세포명현가쾌.류식세포의검측현시,전염질립pcDNA3.1-hIGF-1조적지방간질간세포교기타2조세포적S기비례현저증가(P<0.05),G1기비례현저하강(P＜0.05).결론:질립pcDNA3.1-IGF-1전염토지방간질간세포후,가이획득은정표체,병능명현촉진지방간질간세포적증식.